mRNA široko se koristi u istraživanju funkcija gena ili proteina. Također je uobičajeno u razvoju preventivnih i liječnih bioloških lijekova. Kao česta strategija za sintezu RNA molekula, transkripcija in vitro (IVT) omogućuje nam da dobijemo prilagođene transkripte učinkovito.
Yaohai Bio-Pharma je uspostavila seriju tehnologija za sintezu mRNA kako bi pružila visokokvalitetnu RNA, poput dizajna i optimizacije niza, IVT-a, očišćavanja, liofilizacije i encapsulacije lipidnim nanoparticulama (LNP). Svi proizvodi se oslobađaju pod strognim standardima kontrole kvalitete (QC).
S izbijanjem pandemije COVID-19 2020., mRNA tehnologija se razvila u velikim koracima, a povezana istraživanja i primjene su dobila neverovatno razvoj, uključujući preventivne cjepive za sprečavanje zaraznih bolesti, terapijske onkološke cjepive i lijekove, tumor terapiju, proteinski zamjenski terapiju, regenerativnu medicinu i stanice i genetsku terapiju (CGT).
mRNA cakao | mRNA Lijekovi |
|
Proces | Opcionalna usluga | Detalji usluge | Rok Izrade (radni dan) | Dostavljivo |
dizajn i Optimizacija mRNA Niza | Dizajn i optimizacija kodirajućih nizova | Dizajn CDS niza i optimizacija kodona | 1-3 | Datoteka niza |
Dizajn i optimizacija nekodirajućih nizova | Dizajn i optimizacija UTR, polyA nizova | |||
Priprema transkripcijskog šablon-plazmida | Priprema rekombinantnog plazmida | Sinteza gene | 7-10 | |
Amplifikacija i ekstrakcija plazmida | 4 | |||
Linearizacija i očišćenje plazmida | ||||
transkripcija mRNA in vitro | Kovalentno zaključavanje tijekom transkripcije (jednokoračni postupak) | Transkripcija in vitro (IVT) / Cap analog | 1-2 | N/A |
Modifikacije nukleotida (modifikacije UTP/CTP) | ||||
Uklanjanje DNS šablon (DNase I) | ||||
Enzimatsko zaklapanje (dvostupnačni proces) | IVT | 2-3 | ||
Modifikacije nukleotida (modifikacije UTP/CTP) | ||||
Uklanjanje DNS šablon (DNase I) | ||||
čišćenje mRNA (precipitiranje litijem/hladne čestice) | ||||
Enzimatsko zaklapanje | ||||
čišćenje mRNA | Konvencionalna shema čišćenja | Precipitiranje litijem cloridom | 1 | lijekovita tvari mRNA |
Čišćenje hladnim česticama | ||||
Shema čišćenja stupnjastom kromatografijom | Kombinacija više metoda kromatografije | 1-2 | ||
Zamjena bufera | Ultrafiltracija | 1 | ||
liofilizacija mRNA | Liofilizacija | Prethodno zamičivanje | 2-3 | mRNA liofilizirani prašak |
Prva sušenja (sublimacija) | ||||
Druga sušenja (dezorpcija) | ||||
mRNA inkapsulacija | LNP inkapsulacija | LNP inkapsulacija | 2-3 | mRNA-LNP lijekovni proizvod |
Koncentracija i zamjena bufera | ||||
analiza kvalitete mRNA | mRNA lijekovna tvar / liofilizirani prah | Koncentracija, čistoća | 1 | Izvješće o ispitivanju |
Integritet, učinkovitost zakrpanja, distribucija poliA repa | 2-5 | |||
mRNA-LNP lijekovni proizvod | Učinkovitost inkapsulacije | 1 | ||
Veličina čestica i distribucija | ||||
Površinska nabojnost | ||||
potvrda izražavanja mRNA | ocijenjivanje 293T stanica | Postavljanje stanica | 4 | |
Privremena transfekcija stanica | ||||
Promatranje fluorescentskog signala | 1-3 | |||
Western blot (WB) / Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) |
5' Kap |
▪ Neokapirano ▪ Cap0, zajednički kapiran ▪ Cap1, zajednički kapiran ▪ Cap1, enzimatsko kapiranje |
5' UTR/3' UTR |
▪ Prirodni UTR niz ▪ Mutirani/Inženirani UTR niz |
3' PoliA rep |
▪ 100A ~120A Rep (preporučeno) ▪ Segmentirani polyA rep ▪ Ostali prilagođeni repovi |
Izmijenjeni nukleozidi |
▪ Neizmijenjene baze ▪ Pseudouridin (Ψ) ▪ N1-Metilpseudaureidin (N1Ψ) ▪ 5-metilcitozin (m5C) ▪ 5-metiluridin (m5U) ▪ 5-metoksiuridin (5moU) ▪ 2-tioridin (s2U) ▪ 2′-O-metil-U ▪ Ostale modificiranja |
Integrirani tok usluga
Pružanje niza usluga od dizajna sekvence na početku do pripreme mRNA, kontrole kvalitete i potvrde izražavanja na kraju.
Dizajn i optimizacija sekvenci na međunarodnoj vodećoj razini
Profesionalni dizajn i optimizacija mRNA niza omogućuju učinkovito izražavanje mRNA.
Raznovrsne modifikacije nukleotida
Učinkovito povećavaju izražavanje mRNA i smanjuju nespecificne imune odgovore na mRNA.
Dovršeni platforma za čišćenje
Spojavanjem konvencionalnog i samodizajniranog metoda čišćenja, uzorki mRNA dobivaju se s visokom čistošću.
Potpuna platforma za kontrolu kvalitete
Bogatije opcije kontrole kvalitete da bi se ispunile zahtjeve rutinskih testova, poput koncentracije, A260/280 čistoće i integriteta, te zahtjeva visoke kontrole kvalitete, poput učinka zaklapanja/polyA distribucije.
Brza isporuka
Prilagođena mRNA može biti dostavljena u roku od samo 7 dana, osim u slučaju nadmašnje sinteze niza.