mRNA se široko koristi u proučavanju funkcija gena ili proteina. U međuvremenu, uobičajen je u razvoju profilaktičkih i terapijskih bioloških lijekova. Kao uobičajena strategija sinteze za molekule RNA, in vitro transkripcija (IVT) omogućuje nam učinkovito dobivanje prilagođenih transkripata.
Yaohai Bio-Pharma uspostavila je skup tehnologija sinteze mRNA kako bi osigurala visokokvalitetnu RNA, kao što je dizajn sekvence i optimizacija, IVT, pročišćavanje, liofilizacija i enkapsulacija lipidnih nanočestica (LNP). Svi proizvodi puštaju se pod strogim standardima kontrole kvalitete (QC).
S izbijanjem pandemije COVID-19 2020., mRNA tehnologija je napredovala velikim koracima, a povezana istraživanja i primjene doživjeli su neviđeni razvoj, uključujući profilaktička cjepiva za prevenciju zaraznih bolesti, terapeutska onkološka cjepiva i lijekove, terapiju tumora, proteine nadomjesna terapija, regenerativna medicina i stanična i genska terapija (CGT).
mRNA cjepivo | Terapeutika mRNA |
|
Proces | Dodatna usluga | Pojedinosti usluge | Razdoblje isporuke (radni dan) | isporučiv |
Dizajn i optimizacija sekvenci mRNA | Dizajn i optimizacija sekvenci kodiranja | Dizajn CDS sekvence i optimizacija kodona | 1-3 | Datoteka sekvence |
Dizajn i optimizacija nekodirajućih sekvenci | Dizajn i optimizacija UTR, polyA sekvenci | |||
Transkripcijski šablon Priprema plazmida | Priprema rekombinantnog plazmida | Sinteza gena | 7-10 | |
Amplifikacija i ekstrakcija plazmida | 4 | |||
Linearizacija i pročišćavanje plazmida | ||||
mRNA in vitro transkripcija | Kotranskripcijsko ograničavanje (metoda u jednom koraku) | In vitro transkripcija (IVT) / Cap analog | 1-2 | N / A |
Nukleotidne modifikacije (UTP/CTP modifikacije) | ||||
Uklanjanje DNK predloška (DNase I) | ||||
Enzimsko zatvaranje (proces u dva koraka) | IVT | 2-3 | ||
Nukleotidne modifikacije (UTP/CTP modifikacije) | ||||
Uklanjanje DNK predloška (DNase I) | ||||
pročišćavanje mRNA (litijev klorid/magnetska zrnca) | ||||
Enzimsko zatvaranje | ||||
Pročišćavanje mRNA | Konvencionalna shema pročišćavanja | Taloženje litijeva klorida | 1 | mRNA ljekovita tvar |
Pročišćavanje magnetskim kuglicama | ||||
Shema pročišćavanja kromatografske kolone | Kombinacija više kromatografskih metoda | 1-2 | ||
Razmjena međuspremnika | ultrafiltracija | 1 | ||
Liofilizacija mRNA | Liofilizacija | Prethodno zamrzavanje | 2-3 | mRNA liofilizirani prah |
Primarno sušenje (sublimacija) | ||||
Sekundarno sušenje (desorpcija) | ||||
mRNA enkapsulacija | LNP inkapsulacija | LNP inkapsulacija | 2-3 | mRNA-LNPDrug proizvod |
Koncentracija i izmjena pufera | ||||
Analiza kvalitete mRNA | mRNA ljekovita tvar/liofilizirani prah | Koncentracija, čistoća | 1 | Test Report |
Integritet, učinkovitost zatvaranja, distribucija poliA repa | 2-5 | |||
mRNA-LNP ljekoviti proizvod | Učinkovitost enkapsulacije | 1 | ||
Veličina i raspodjela čestica | ||||
Površinski naboj | ||||
Validacija ekspresije mRNA | Procjena 293T stanica | Oblaganje ćelija | 4 | |
Prolazna transfekcija stanica | ||||
Promatranje fluorescentnog signala | 1-3 | |||
Western blot (WB)/enzimski imunoanaliza (ELISA) |
5' Cap | ▪ Bez poklopca ▪ Cap0, co-capped ▪ Cap1, co-capped ▪ Cap1, enzimsko zatvaranje |
5' UTR/3' UTR | ▪ Prirodni UTR niz ▪ Mutant/Projektirana UTR sekvenca |
3' PoliA rep | ▪ 100A ~120A rep (preporučeno) ▪ Segmentirani poliA rep ▪ Ostali prilagođeni repovi |
Modificirani nukleozidi | ▪ Nemodificirane baze ▪ Pseudouridin (Ψ) ▪ N1-metilpseudouridin (N1Ψ) ▪ 5-metilcitozin (m5C) ▪ 5-metiluridin (m5U) ▪ 5-metoksiuridin (5moU) ▪ 2-tiouridin (s2U) ▪ 2'-O-metil-U ▪ Ostale izmjene |
Tijek integrirane usluge
Pružite niz usluga od dizajna prednje sekvence do pripreme zadnje mRNA, kontrole kvalitete i validacije ekspresije.
Međunarodni vrhunski dizajn sekvenci i optimizacija
Profesionalni dizajn sekvence mRNA i optimizacija olakšavaju učinkovitu ekspresiju mRNA.
Raznovrsne modifikacije nukleotida
Učinkovito povećava ekspresiju mRNA i smanjuje negativne imunološke reakcije mRNA.
Zrela platforma za pročišćavanje
Kombinacijom konvencionalne i vlastito osmišljene metode pročišćavanja dobivaju se uzorci mRNA visoke čistoće
Potpuna QC platforma
Obogatite mogućnosti kontrole kvalitete kako biste ispunili zahtjeve rutinskih testova, kao što su koncentracija, A260/280 čistoća i cjelovitost, kao i visoke zahtjeve kontrole kvalitete, kao što je učinkovitost zatvaranja/polyA distribucija.
Brza dostava
Prilagođena mRNA može se isporučiti za čak 7 dana, osim za sintezu sekvenci vanjskih izvođača.