U usporedbi s dvostepnim enzimatskim cappingom, jednostepna co-transkripcijska metoda može značajno smanjiti procesni tok. Metoda je rezultat-oriëntirana i uključuje dodavanje kap analoga u reakciju in vitro transkripcije (IVT). Kap analozi mogu biti uvijeni na početku transkripcije, a mRNA s kap strukturom može se dobiti nakon završetka transkripcije. Trenutni treći generacije kap analozi mogu izbjegavati obrnuti capping i direktno dodavati Cap 1 strukturu transkripcijskom produktu.
Za razmatranja imunogeneznosti mRNA u živome tijelu i učinkovitosti prijevoda, proces IVT često koristi određene vrste modifikovanih NTP-a, a uobičajeni modifikovani nukleotidi su pseudouridin (Ψ), N1-metil-pseudouridin (N1Ψ) i 5-metilcitozin (5mC).
Slika: Dijagram mRNA Co-transkripcijske i Capping Reakcije
Usluga |
Detalji usluge |
Rok Izrade (radni dan) |
Co-transkripcijsko capping |
Transkripcijska odgovorna u vitro (Clean Cap analog) | 1-2 |
Modifikacije nukleotida (Ψ/N1Ψ/5mC) | ||
Uklanjanje DNS šablon (DNase I) | ||
Optimizacija uvjeta IVT-a - opcionalno |
Dizajn i optimizacija komponenti reakcije | 3-7 |
Više opcionalnih strategija modifikacije nukleotida može poboljšati izraz proteina.
Postignite visoki omjer transkripcije i visoku učinkovitost zaklapanja.
Postignite stopu zaklanja veću od 95%.
Učinkovito sprečite degradaciju mRNA strogim kontrolom RNaze u eksperimentalnom okruženju i potrošačkim materijalima.
Yaohai Bio-Pharma je izgrađena zrela platforma za zaklanje tijekom transkripcije, koristeći čist cap analog kako bi se Cap1 struktura dodala direktno, izbjegavajući obrnuto zaklanje. Nakon standardiziranog prijeloma uzorka i detekcije kapilarne elektroforezom (CE), stopa zaklanja pojačanog zelenog fluorescentskog proteina (eGFP) mRNA može dostići više od 95%.
efikasnost zaklanja eGFP mRNA više od 95%
EGFP mRNA i mCherry mRNA pripremljene zaklanjem tijekom transkripcije transfirane su u 293T stanice, redom, a jačan fluorescentski signal opažen je nakon 48 sati, što ukazuje na to da se mRNA učinkovito izražava u 293T stanicama.
Izraz eGFP mRNA i mCherry mRNA u 293T stanici