Osnova enkapsulacije je dizajn i razvoj sustava isporuke. Dobro osmišljen sustav isporuke omogućuje molekulama circRNA da uđu u tijelo bez da ih razgrade RNA enzimi, a zatim se učinkovito dostave na ciljno mjesto, prođu staničnu membranu i otpuste unutar stanice.
Lipidne nanočestice (LNP) su najbolji dostupni sustavi isporuke, s prednostima u kapsuliranju, in vivo ekspresiji i in vivo sigurnosti u usporedbi s drugim sustavima dostave. LNP s fragmentima nukleinske kiseline lako se gutaju u stanice i formiraju unutarstanična tijela. Jednom kada uđe u stanicu, kiseli okoliš unutarstaničnog tijela protonira i pozitivno nabije glavu ioniziranog lipida, spajajući se na taj način s unutarnjom membranom unutarstaničnog tijela i otpuštajući ciljnu nukleinsku kiselinu u stanicu za djelovanje.
Usluga Yaohai Bio-Pharma circRNA nastavlja se poboljšavati i može pružiti uslugu enkapsulacije circRNA-LNP za optimizaciju relevantnih kritičnih parametara procesa i poboljšanje dosljednosti i ponovljivosti proizvodnje lijeka circRNA.
Proces | Pojedinosti usluge | Razdoblje isporuke (dan) | isporučeno |
circRNA-LNP enkapsulacija | Predobrada materijala i tekućine | 2 | circRNA-LNP lijek (DP) |
Miješanje mikrofluidnih uređaja | |||
Tangencijalno filtriranje protoka | 1 | ||
Sterilizacijska filtracija | |||
kontrola kvalitete circRNA-LNP | Učinkovitost enkapsulacije | 1 | Test Report |
Veličina čestica i indeks polidisperznosti | |||
Zeta potencijal |
Brza sinteza, visoka učinkovitost istraživanja i razvoja i unaprijed optimizirana rješenja;
Omjer inkapsulacije može doseći više od 90%;
Veličina lipidnih nanočestica može se kontrolirati promjenom brzine i omjera ubrizgavanja tekućine;
Proizvodi circRNA-LNP potvrđeni su in vitro ekspresijom stanica i mogu učinkovito eksprimirati ciljani protein.
Pripremaju se uzorci LNP-eGFP circRNA i njihove različite doze (1ug, 2ug i 4ug) izravno se transficiraju u 293T stanice kako bi se provjerilo mogu li eksprimirati ciljni protein. Nakon 48 sati od transfekcije, može se uočiti jasan fluorescentni signal i postoji učinak povećanja doze intenziteta fluorescencije.
Lipo-circ_eGFP, sastavljen od liposoma i neinkapsulirane eGFP circRNA, uzet je kao kontrola.