Razvoj procesa mRNA

Kružni plazmid DNA (pDNA), kao početni materijal, treba biti potpuno lineariziran kako bi se proizveo RNA transkript definirane duljine.
Kao uobičajena strategija sinteze za RNA molekule, in vitro transkripcija (IVT) omogućuje nam učinkovito dobivanje prilagođenih prijepisa. IVT je složena reakcija koja zahtijeva mješavinu DNA šablona, RNA polimeraze, inhibitora RNase, anorganske pirofosfataze, kofaktora, nemodificiranih ili modificiranih nukleozid trifosfata (NTP) i pufera za proizvodnju mRNA transkripata. Idealan prinos RNA ne može se postići s jednom otopinom, budući da ovisi o različitim čimbenicima reakcije. Dodatno, IVT reakcija može ovisiti o sekvenci.
Nakon IVT reakcije, nečistoće povezane s proizvodom i procesom (npr. dsRNA, skraćeni fragmenti RNA, predložak DNA, NTP i RNA polimeraza) treba ukloniti kako bi se dobila čista mRNA kao aktivni farmaceutski sastojak (API).

Naše dostupne opće usluge razvoja procesa mRNA uključuju:

Kvaliteta prema dizajnu (QbD)

Dizajn iskustva (DoE)

Jedan faktor po jedan (OFAT)

Pojedinosti usluge	Operacije jedinice	Parametri
Jednoenzimska probava	Probavna reakcija	Komponente reakcije, volumen, brzina vrtnje
Linearizirano pročišćavanje DNK	IEX, kromatografija anionske ili kationske izmjene	Vrste kromatografske smole/kolone Sastav pufera, Sastav mobilne faze, pH, Brzina protoka, uvjeti vezivanja, ispiranja i eluiranja.
Linearizirano pročišćavanje DNK	RPC, kromatografija reverzne faze
Sinteza mRNA IVT	IVT reakcija	Komponente reakcije IVT, volumen, brzina vrtnje, vrijeme IVT
Sinteza mRNA IVT	uklanjanje DNK	Koncentracija DNaze
Enzimsko zatvaranje	Reakcija zatvaranja	Komponente reakcije, volumen, brzina vrtnje
Pročišćavanje mRNA	AC, Afinitetna kromatografija	Nekoliko vrsta kromatografskih smola/kolona (npr. AC, IEX, RPC, SEC, MMC), sastav pufera, volumen injekcije, sastav mobilne faze (adsorpcija i desorpcija), pH, brzina protoka, uvjeti vezanja, ispiranja i eluiranja.
	IEX, anionska ili kationska izmjenjivačka kromatografija
	SEC, desalinizacija i/ili kromatografija za isključivanje veličine
	RPC, kromatografija reverzne faze
	MMC, mješovita kromatografija
	Tangencijalno filtriranje protoka	Materijal membrane i veličina pora, brzina protoka hrane, transmembranski tlak (TMP), omjer volumena filtrata i površine membrane

Razvoj procesa mRNA Hrvatska