Što se tiče masovne proizvodnje mRNA, in vitro transkripcija (IVT) je učinkovitija i zrelija metoda. IVT reakcija usvaja lineariziranu plazmidnu DNA koja sadrži T7 promotor kao predložak, a mRNA se sintetizira s nukleozid trifosfatima (NTP) kao supstratima u prisutnosti T7 RNA polimeraze.
Modifikacija nukleotida je napredak u istraživanju mRNA, gdje unutarstanični RNA senzori prepoznaju nemodificirane mRNA molekule kako bi aktivirali urođenu imunost. Za razmatranje imunogenosti mRNA in vivo i učinkovitosti prevođenja, IVT proces obično koristi određene vrste modificiranih NTP-ova, a uobičajeni modificirani nukleotidi su pseudouridin (Ψ), N1-metil-pseudouridin (N1Ψ) i 5-metilcitozin (5mC).
In vitro proces transkripcije mRNA
Dijagram reakcije in vitro transkripcije (IVT).
Pojedinosti o uslugama
Dodatna usluga |
Pojedinosti usluge |
Razdoblje isporuke (radni dan) |
In vitro transkripcija (IVT) |
IVT, In vitro transkripcija |
1 |
| Nukleotidne modifikacije (Ψ/N1Ψ/5mC, itd.) |
| Uklanjanje DNK predloška (DNase I) |
Optimizacija uvjeta IVT - opcija |
Projektiranje i optimizacija reakcijskih komponenti IVT |
2-5 |
Naše značajke
- Raznovrsne strategije modifikacije nukleotida
Poboljšajte stabilnost mRNA i ekspresiju proteina in vivo.
- Rigorozan dizajn testa i optimizacija
Može se postići priprema fragmenata mRNA do 10 kb.
Optimiziranjem uvjeta IVT reakcije, brzina transkripcije je do 1:200.
Stroga kontrola RNaze kroz eksperimentalno okruženje i potrošni materijal može učinkovito spriječiti degradaciju mRNA.
Studija slučaja
Trenutačni reakcijski sustav IVT grubo je optimiziran za sintetičke sustave duljine od oko 100 nt, a ne za mRNA proizvoljne duljine. Što je sekvenca mRNA duža, to ju je teže prepisati i sklonija je degradaciji.
Kako bi se pripremile prilagođene mRNA sekvence duljine oko 10 kb, Yaohai Bio-Pharma je uspješno pripremila visokokvalitetne uzorke s visokim omjerom transkripcije od 1:135 i dobila 135 μg inicijalno pročišćenih mRNA proizvoda nakon 1 μg lineariziranog plazmida je prepisan in vitro rigoroznim eksperimentalnim dizajnom, kontinuiranom optimizacijom reakcijskih uvjeta i strogom kontrolom RNaze.
Identifikacija mRNA (elektroforeza u agaroznom gelu)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
