Podaci o peptidnoj kartografiji temeljeni na tehnologiji likvidne kromatografije-masenske spektrometrije (LC-MS) pružit će veliku količinu informacija o primarnoj i višim redovima strukture prirodnih i rekombinantnih proteina, uključujući pokrivenost sekvencama aminokiselina, post-transkripcijske modifikacije (PTMs, npr. glikozacijoniranje, oksidacija, deamidacija), disulfidne veze itd.
Yaohai Bio-Pharma nude usluge analize peptidne kartografije za vaš ciljni protein pomoću LC-MS-a kako biste ubrzali svoje istraživanje strukture proteina.
Bili smo angažirani u karakterizaciji strukture proteina različitih velikih molekula, uključujući Rekombinantne Podjedinične Cijepe, Nanotijele/VHHs/Jednodomene Antitijela (sdAbs), Odlomke Antitijela, Hormone/Peptidi, Cytokine, Rastni Faktori (GF), Enzime, Kolačaste Tkanine itd.
Uredbe o Peptidnoj Kartografiji
Smjernica ICHQ6B preporučuje, „Selektivno razbijanje proizvoda u diskretne peptide izvršava se pomoću odgovarajućih enzima ili kemikalija, a dobivene peptidske fragmente analiziraju se HPLC-om ili drugom odgovarajućom analitičkom procedurom. Peptidske fragmente treba identificirati što je moguće više koristeći tehnike poput analize sastava aminokiselina, N-terminalske sekveniranje ili masovne spektroskopije (MS). Peptidska kartografija aktivne tvari ili lijekovnog proizvoda (DP) pomoću odgovarajuće validirane metode često se koristi za potvrdu željenog strukturnog oblika pri otpuštanju serije.“
Analitičke metode
| Analiza |
Metode |
| Kartografiranje peptida |
Proteaza Degradacija i Kapilarna Hromatografija-Masovna Spektroskopija (LC-MS) |
Analitička Procedura
1. Redukcija i Alkilacija
Cilj je smanjiti disulfidne mostove i blokirati nastale slobodne tiol. Smanjenje disulfidnih mostova pomaže u otvaranju strukture proteina, što čini proteolitičko rasipanje učinkovitijim. Ovaj korak će također prekinuti mostove između lanaca u slučaju višelancastih proteina koji imaju disulfidne mostove koji spajaju lanac (npr. monoklonalni antigoni, mAbs).
2. Rasipanje proteina pomoću enzima
Cilj je razbiti protein na peptide. Izabrali smo enzime na temelju teorijskog niza proteina i znanja o teorijskom rasipanju proteina enzimima. Izbor enzima na ovaj način bi trebao rezultirati najboljom analizom peptidske mape.
3. Analiza rasipanih peptida Koristeći On-line Reversnu Fazu-High Performance Liquid Chromatography s Ultravioletnom (UV) i Elektrospray-Mass Spektrometrijskom Detekcijom (LC/ES-MS).
Odvojavanje peptida na temelju polarnosti pomoću LC (reversna faza-LC)
Dok peptid izlazi s LC kolone, masa spektrometar će generirati podatke o masi uz informacije o fragmentnim jonima, što nam omogućava određivanje redoslijeda. Koristimo informacije o redoslijedu da potvrdimo identitet peptida i pružimo osnovne informacije.
Također možemo generirati informacije o fragmentiranju iz peptida dok ulaze u izvor mase spektrometra s LC kolone. Ovisno o zahtjevima studije, to je bilo selektivno LC-MS/MS ili neoselektivno, što se može smatrati oblikom tandem MS-a.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
