Podaci mapiranja peptida temeljeni na tekućoj kromatografiji-masenoj spektrometriji (LC-MS) pružit će veliku količinu informacija o primarnoj strukturi i strukturi višeg reda nativnih i rekombinantnih proteina, uključujući pokrivenost aminokiselinske sekvence, post-translacijske modifikacije (PTM, npr. glikozilacija , oksidacija, deamidacija), disulfidne veze itd.
Yaohai Bio-Pharma nudi usluge analize mapiranja peptida za vaš ciljni protein pomoću LC-MS, kako bi se ubrzalo vaše istraživanje strukture proteina.
Sudjelovali smo u strukturnoj karakterizaciji proteina raznih velikih molekula, uključujući rekombinantna podjedinična cjepiva, nanotijela/VHH/protutijela s jednom domenom (sdAbs), fragmente antitijela, hormone/peptide, citokine, faktore rasta (GF), enzime, kolagene, itd.
Regulatorni zahtjevi za mapiranje peptida
Smjernice ICHQ6B preporučuju: „Selektivna fragmentacija proizvoda u diskretne peptide izvodi se pomoću odgovarajućih enzima ili kemikalija, a rezultirajući fragmenti peptida analiziraju se HPLC-om ili drugim odgovarajućim analitičkim postupkom. Peptidne fragmente treba identificirati što je moguće više tehnikama kao što su analiza sastava aminokiselina, N-terminalno sekvenciranje ili masena spektrometrija (MS). Peptidno mapiranje djelatne tvari ili lijeka (DP) korištenjem odgovarajuće validirane metode metoda je koja se često koristi za potvrdu željene strukture proizvoda za puštanje serije.”
Analitičke metode
| Analiza |
Metode |
| Mapiranje peptida |
Digestija proteaze i tekućinska kromatografija-masena spektrometrija (LC-MS) |
Analitički postupak
1. Redukcija i alkilacija
Svrha je smanjiti disulfidne mostove i blokirati generirani slobodni tiol. Redukcija disulfidnih mostova pomaže u otvaranju proteinske strukture što čini proteolitičku probavu učinkovitijom. Ovaj korak također će prekinuti mostove između lanaca u slučaju višelančanih proteina koji imaju disulfidne mostove koji povezuju lance (npr. monoklonska antitijela， mAbs).
2. Probava proteina pomoću enzima
Svrha je razgraditi protein u peptide. Enzime smo odabrali na temelju teorijske sekvence proteina i poznavanja teorijske probave proteina enzimima. Odabir enzima na ovaj način trebao bi rezultirati najboljom analizom mapiranja peptida.
3. Analiza probavljenih peptida Korištenje on-line reverzne fazne tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti s ultraljubičastom (UV) i elektrosprejnom spektrometrijskom detekcijom mase (LC/ES-MS).
Odvajanje peptida na temelju polariteta pomoću LC (reverzna faza-LC)
Kako peptid eluira iz LC kolone, maseni spektrometar će generirati informacije o masi zajedno s informacijama o fragmentima iona, što nam omogućuje određivanje informacija o sekvenci. Informacije o sekvenci koristimo za potvrdu identiteta peptida i pružanje primarnih informacija.
Također možemo generirati informacije o fragmentaciji iz peptida dok ulaze u izvor masenog spektrometra iz LC kolone. Ovisno o zahtjevima studije, ovo je ili selektivna LC-MS/MS ili neselektivna, koja se može smatrati oblikom tandemske MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
