Rekombinantni proteini često doživljavaju oksidaciju izloženih bočnih lanaca aminokiselina, kao što su triptofan (Trp) i metionin (Met), mijenjajući fizikalno-kemijska svojstva proteina. Te promjene mogu zauzvrat doprinijeti mijenjanju bioloških funkcija zahvaćenih proteina, kao što je gubitak vezanja, smanjenje enzimske aktivnosti, neočekivano brzo uklanjanje. Proteini su važne mete za oksidativne reakcije jer brzo reagiraju s oksidansima i obiluju ih u stanicama, izvanstaničnim tkivima i tjelesnim tekućinama.
Stoga je praćenje oksidacije proteina ključno za uspješan biofarmaceutski razvoj.
Yaohai Bio-Pharma nudi uslugu analize oksidacije aminokiselina, koja vam omogućuje određivanje oksidacije aminokiselina pomoću tekućinske kromatografije-masene spektrometrije (LC-MS).
Sudjelovali smo u strukturnoj karakterizaciji proteina raznih velikih molekula, uključujući rekombinantna podjedinična cjepiva, nanotijela/VHH/protutijela s jednom domenom (sdAbs), fragmente protutijela, hormone/peptide, citokine, faktore rasta (GF), enzime, kolagene, itd.
Regulatorni zahtjevi za oksidaciju aminokiselina
Prema smjernicama ICH Q6B, oksidirani oblici mogu se detektirati i karakterizirati kromatografskim, elektroforetskim i/ili drugim relevantnim analitičkim metodama (npr. tekućinskom kromatografijom visoke učinkovitosti (HPLC), kapilarnom elektroforezom, masenom spektroskopijom, kružnim dikroizmom).
Analitičke metode
| Analiza |
Metode |
| Oksidacija aminokiselina |
LC-MS, reverzno-fazna tekuća kromatografija visoke učinkovitosti (RP-HPLC) ili hidrofobna interakcijska kromatografija, tekuća kromatografija visoke učinkovitosti (HIC-HPLC) i masena spektrometrija |
Analitički postupci
1. Priprema uzorka
2. LC-MS
3. Analiza podataka
Ostaci triptofana (Trp) posebno su skloni oksidaciji zbog visoke reaktivnosti aromatskog indola s reaktivnim vrstama kisika. Trp oksidacija zahtijeva određeno izlaganje Trp ostataka koji su inače zakopani u trodimenzionalnoj strukturi proteina.
Međutim, kada se Trp ostaci oksidiraju, mogu se transformirati u razne proizvode s vrlo različitim svojstvima od izvornog Trp. Najčešći put za Trp oksidaciju uključuje stvaranje N-formilkinurenina (razlika mase: +32).
Još jedna često oksidirana aminokiselina je metionin. Atom sumpora u ostatku Met može prihvatiti ili jedan ili dva atoma kisika što dovodi do stvaranja sulfoksida (razlika mase: +16) ili sulfona (razlika mase: +32), odgovarajuće. Ova je modifikacija relativno česta zbog tipično visoke površinske izloženosti Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
