Rekombinantne proteine često imaju oksidaciju izloženih bočnih lanaca aminokiselina, poput tryptofana (Trp) i metionina (Met), što mijenja fizikalno-kemijske svojstva proteina. Ove promjene mogu utjecati na biološke funkcije odgovarajućih proteina, kao što su gubitak vezivanja, smanjenje enzimatske aktivnosti, neočekivano brzo uklanjanje. Proteini su važni ciljevi za oksidativne reakcije jer reaguju brzo s oksidatorima i obiluju u ćelijama, ekstracelularnim tkivima i tjelesnim tečnostima.
Stoga je praćenje oksidacije proteina ključno za uspješni razvoj biofarmaceutske industrije.
Yaohai Bio-Pharma pruža uslugu analize oksidacije aminokiselina, koja vam omogućuje određivanje oksidacije aminokiselina pomoću tekućinske kromatografije-masenspektrometrijom (LC-MS).
Bili smo uključeni u karakterizaciju strukture proteina različitih velikih molekula, uključujući rekombinantne subjedinične cjepive, Nanotijele / VHHs / jednodomene antigene (sdAbs), odlomke antigena, hormone / peptidi, citochine, faktore rasta (GF), enzime, kolažene itd.
Uredbe o oksidaciji aminokiselina
Prema smjernicama ICH Q6B, oksidirane forme mogu biti otkrivene i karakterizirane hromatografskim, elektroforetičkim i/ili drugim relevantnim analitičkim metodama (npr., visoko performantna tekuća hromatografija (HPLC), kapilarna elektroforeza, masenska spektroskopija, cirkularna dihroizam).
Analitičke metode
| Analiza |
Metode |
| Oksidacija aminokiselina |
LC-MS, obrnutafazna visoko performantna tekuća hromatografija (RP-HPLC) ili hidrofobna interakcijska hromatografija visoko performantna tekuća hromatografija (HIC-HPLC) i masenska spektroskopija |
Analitički postupci
1. Priprema uzorka
2. LC-MS
3. Analiza podataka
Residui triptofana (Trp) su posebno podložni oksidaciji zbog visoke reaktivnosti aromatičnog indola s reaktivnim vrstama kiseonika. Oksidacija Trp zahtjeva neku izloženost Trp residua koji su obično zakopani u trodimenzionalnoj strukturi proteina.
Međutim, kada se Trp residui oksidiraju, mogu se transformirati u različite proizvode sa vrlo različitim svojstvima od izvornog Trp. Najčešći putanj za oksidaciju Trp uključuje formiranje N-formilkineurina (Razlika u masi: +32).
Još jedan često oksidirani aminokiselina je metionin. Sumpor atom u Met residuu može prihvatiti jedan ili dva kisikovska atoma što vodi do formiranja sulfovida (Razlika u masi: +16) ili sulfona (Razlika u masi: +32), odgovarajuće. Ova modifikacija je relativno česta zbog tipično visoke izloženosti površine Met.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
