Profiliranje N-glikana bitno je za proizvodnju biofarmaceutika. Yaohai Bio-Pharma pruža uslugu profiliranja N-glikana pomoću tekućinske kromatografije-masene spektrometrije (LC-MS) oslobođenih i obilježenih glikana. Opći koraci za pripremu uzorka N-glikana uključuju digestiju glikoproteina (GP), deglikozilaciju, pročišćavanje, označavanje/derivatizaciju i ekstrakciju čvrste faze (SPE).
Sudjelovali smo u strukturnoj karakterizaciji proteina raznih velikih molekula, uključujući rekombinantna podjedinična cjepiva, nanotijela/VHH/protutijela s jednom domenom (sdAbs), fragmente antitijela, hormone/peptide, citokine, faktore rasta (GF), enzime, kolagene, itd.
Regulatorni zahtjevi za profiliranje N-glikana
Prema ICH Q6B smjernici, „za glikoproteine se određuje sadržaj ugljikohidrata (neutralni šećeri, amino šećeri i sijalične kiseline). Dodatno, struktura lanaca ugljikohidrata, oligosaharidni uzorak (profil antene) i mjesto(a) glikozilacije polipeptidnog lanca analiziraju se u najvećoj mogućoj mjeri.
Analitička metoda
| Analiza |
Metode |
| Profiliranje N-glikana |
Tekuća kromatografija-masena spektrometrija (LC-MS) analiza otpuštenih i obilježenih glikana |
Procedure
1. Enzimsko otpuštanje glikana s peptidnom N-glikozidazom F (PNGase F)
2. Derivatizacija oslobođenih glikana pomoću 2-aminobenzamida (2-AB)
3. Pročišćavanje sakupljenih N-glikana na koloni TSK Amide - 80 ako su prisutne velike količine deterdženata, nehlapljivih soli ili materijala sa slobodnim amino skupinama
4. Označavanje fluorescentnim 2-aminobenzamidom (2-AB)
5. LC-MS analiza obilježenih N-glikana
6. Analiza podataka
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
