In Vitro syntéza mRNA
Hlavné komponenty mRNA sú 5’-cap, 5’-UTR, otvorená čítacia rámcova (ORF), 5’-UTR a 5’ poly A chvost, ktoré sú nevyhnutné na udržanie funkcie mRNA. Výskumnici použili mnoho metód na identifikáciu a optimalizáciu postupov mRNA a ich štruktúr.
Syntéza mRNA sa vykonáva na základe in vitro transkripcie (IVT) pomocou lineárnych DNA šablón, RNA polymeráz (T3, T7 alebo SP6), neupravených alebo upravených nukleotídov, enzymov a príslušných reagentov.
modifikácia 5’ Cap
Postupnosti zrelého mRNA z eukaryotických buniek ukazujú 7-metylguanosínový (m7G) klobúčik na 5' konci, ktorý zvyšuje stabilitu mRNA a efektívnosť prekladu. Existujú dva bežné spôsoby zachytenia mRNA in vitro. Po prvé, mRNA môže byť zakončená pomocou prideľovania kapaného analogu m7GpppG štruktúry (napr., CleanCap) do systému IVT. Táto transkripčná metóda zakončenia poskytuje prirodzenú 5' kapovú štruktúru a zvýši účinnosť zakončenia takmer na 90-99%. Po druhé, mapovanie mRNA sa tiež dá vykonať pomocou enzymatických reakcií po transkripcii in vitro.
PolyA Modifikácia
Poly(A) chvost tiež predĺži polovicný čas existencie mRNA v vivo a zlepšuje efektívnosť prekladu mRNA. Dĺžka amplifikovaného poly(A) chvosta by mala byť 100-300 nukleotidov. Okrem toho zvyšuje modifikované adéninovo stabilitu poly A chvosta voči degradácii bunecnou RNase. Poly A chvost môže byť vložený pomocou in vitro transkripcie pomocou DNA šablóny kódovanej pre poly A, čím sa vytvorí určitá dĺžka poly A sekvencie. Môže sa tiež použiť rekombinantná poly A polymeráza enzymatickou polyadenyláciou po transkripcii mRNA.
Modifikácia nukleotidov
Modifikované nukleozydy môžu inhibovať rozpoznávanie a/alebo aktiváciu receptorov pre rozpoznanie vzorov (PRR) a zvyšovať účinnosť mRNA vakcín dvojím úplne odlišným spôsobom. Pridanie určitých chemicky modifikovaných nukleozidov, vrátane pseudouracilu (ψ), 1-methylpseudouracilu (m1ψ), thiouracilu (s4U) a 5-methylcytosinu (m5C), môže prevencia aktiváciu TLR7/8 a iných receptorov innate imunity, čo významne zníži imunogennosť mRNA.
systém dodania mRNA
Pre zachovanie funkcie mRNA je potrebné, aby vstupovala do cytoplazmy hostiteľa a vyjadrovala špecifické antigény. Jednou z najnáročnejších výziev pre mRNA vakcíny a liečby je dodanie mRNA do cieľových buniek s dostatočne vysokými úrovňami prekladu, čo vyžaduje veľmi špecifické a efektívne systémy dodávania mRNA. Bolo vyvinutých a použitých niekoľko vektorov na dodávanie mRNA, vrátane dendritických buniek (DCs), protaminu, kationtých polyméroch a kationtých liposóm.
Komplexy kationických lipidov s mRNA a ďalšie prípravky môžu spoločne tvoriť 80-200 nm veľké nanocastičky nazvané lipidné nanocastičky (LNP). Jako jedno z najpokročilejších systémov pre dodanie mRNA obsahuje LNP ionizovateľné kationické lipidy, prirodzené fosfolipidy, cholesterol a polyetylen glykol (PEG). Niekoľko RNA vakcín a terapií (siRNA a mRNA), ktoré schválila Americká agentúra pre liečivá a potravinársky dozor, je založené na systémoch pre dodanie LNP.
Yaohai Bio-Pharma Ponúka Komplexné Riešenia pre RNA
Vlastné Dodávky
|
Stupňovanie
|
Výstupy
|
Špecifikácia
|
Aplikácie
|
|
ne-GMP
|
Liečivá látka, mRNA
|
0,1~10 mg (mRNA)
|
Predklinická výskum, ako je transfekcia buniek, Vývoj analytických metód, Predstabilizačné štúdie, Vývoj formulácie
|
|
Liekový produkt, LNP-mRNA
|
|
GMP, Sterilita
|
Liečivá látka, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Žiadosť o nový liekový produkt (IND), Autorizácia klinických skúšok (CTA), Zásoby na klinické skúšky, Žiadosť o licenciu biologického lieku (BLA), Komerčné zásoby
|
|
Liekový produkt, LNP-mRNA
|
5000 ampuliek alebo prednaplnených šypôv/kartáčikov
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
