Enzimas para Produção de mRNA

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Enzimas para Produção de RNA

Enzimas Chave para Produção de Longo-RNA

mRNA, como um tipo de longo RNA codificante, foi realizado com segurança e eficiência em uma faixa mais ampla de pessoas durante a pandemia de COVID-19. Outros RNAs de longa codificação, como RNA autoamplificável (saRNA) e mRNA circular (circRNA), também mostraram eficiência em estudos pré-clínicos e clínicos.

A produção em larga escala de RNA de longa codificação depende da transcrição in vitro (IVT) por várias reações enzimáticas. As etapas de produção de RNA incluem preparação do DNA modelo, síntese de RNA por IVT, circulação, remoção de DNA, modificação de RNA (capping e tailing) e purificação de RNA.

Existem várias enzimas-chave utilizadas na produção de RNA de longa codificação (por exemplo, mRNA, saRNA e circRNA), incluindo endonucleases de restrição, polimerase de RNA T7 (T7 RNAP), inibidor de RNase, pirrofosfatase inorgânica, DNase I, enzima de capping de vaccinia e RNase R.

Processo	Enzima	Função
Preparação do DNA modelo	Endonucleases de restrição	Linearização do DNA de plasmídeo (pDNA) para evitar a geração de um transcripto mais longo.
Síntese de RNA por IVT	T7 RNA polimerase (T7 RNAP)	Ligar-se ao promotor T7 e gerar o transcripto de RNA específico; Desempenhar um papel fundamental durante a reação de IVT.
	Inibidor de RNase, recombinante	Inibir a atividade de RNase durante a reação IVT.
	Pirofosfatase, inorgânica (iPPase)	Prevenir a formação de pirofosfato durante a reação IVT.
Remoção de DNA	DNase I	Remova o template de DNA.
Modificação de RNA	Enzima de encobrecimento da Vaccinia	Adicione estruturas Cap1 às extremidades 5′ do mRNA de IVT.
Modificação de RNA	2’-O-Metiltransferase	Adicione estruturas Cap1 às extremidades 5′ do mRNA de IVT.
Enriquecimento de circRNA	Rnase r	Degrada RNA linear e enriquece RNA circular.

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