Enzimas Chave para Produção de RNA Longo
O mRNA, como um tipo de RNA de codificação longa, teve um desempenho seguro e eficiente em uma gama mais ampla de pessoas durante a COVID-19. Outros RNAs de codificação longa, como o RNA autoamplificador (saRNA) e o mRNA circular (circRNA) também mostraram eficiência em estudos pré-clínicos e clínicos.
A produção em larga escala de RNA de codificação longa depende da transcrição in vitro (IVT) por meio de diversas reações enzimáticas. As etapas da produção de RNA incluem preparação de DNA modelo, síntese de RNA IVT, circulação, remoção de DNA, modificação de RNA (capeamento e cauda) e purificação de RNA.
Existem várias enzimas-chave usadas na produção de RNA de codificação longa (por exemplo, mRNA, saRNA e circRNA), incluindo endonucleases de restrição, RNA polimerase T7 (T7 RNAP), inibidor de RNase, pirofosfatase inorgânica, DNase I, enzima de capping de vaccinia e RNase R.
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Extração
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Enzima
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função
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Preparação de modelo de DNA
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Endonucleases de restrição
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Linearização do DNA plasmídico (pDNA) para evitar a geração de transcrições mais longas.
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Síntese de RNA IVT
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RNA polimerase T7 (RNAP T7)
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Liga-se ao promotor T7 e gera transcrição específica de RNA; Desempenha um papel fundamental durante a reação IVT.
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Inibidor de RNase, recombinante
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Inibir a atividade da RNase durante a reação IVT.
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Pirofosfatase Inorgânica (iPPase)
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Evite o pirofosfato durante a reação IVT.
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Remoção de DNA
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DNase I
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Remova o modelo de DNA.
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Modificação de RNA
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Enzima de proteção contra vacínia
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Adicione estruturas Cap1 às extremidades 5' do mRNA IVT.
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2'-O-Metiltransferas
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enriquecimento de circRNA
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RNase R
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Digerir RNA linear e enriquecer RNA circular.
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