Substâncias farmacêuticas biológicas são moléculas complexas grandes, particularmente sensíveis a fatores ambientais: temperatura, oxidação, luz, conteúdo iônico e cisalhamento. É crucial realizar estudos de estabilidade sobre a substância farmacêutica e o produto farmacêutico sob condições de armazenamento previstas, condições aceleradas e condições de degradação forçada. Os dados de estabilidade geralmente são usados para sustentar a vida útil, a data de validade e as condições de armazenamento.
Seguindo a orientação ICH Q5C, Yaohai Bio-Pharma oferece serviços de estudo de estabilidade para proteínas, peptídeos, plasmídeos e mRNAs, envolvendo estudos de estabilidade de longo prazo, estudos de estabilidade acelerada e estudos de degradação forçada. Além disso, temos todas as capacidades necessárias para armazenamento de amostras e análise de Atributos Críticos de Qualidade (CQA) para coletar dados de estabilidade.
Requisitos Regulatórios para Estudos de Estabilidade
De acordo com a diretriz ICH Q5C, “Os dados de estabilidade adequados devem ser desenvolvidos para produtos biotecnológicos/biológicos, pois muitas condições externas podem afetar a potência, pureza e qualidade do produto. Também é altamente recomendável que estudos sejam realizados na substância medicinal e no produto farmacêutico sob condições aceleradas e de estresse.
Estudos de Estabilidade em Tempo Real (a longo prazo)
Em testes de estabilidade em tempo real (a longo prazo), a substância medicinal ou o produto farmacêutico é armazenado sob as condições de armazenamento previstas e monitorado até que as características biológicas mudem além dos limites aceitáveis. Como resultado dos estudos de estabilidade a longo prazo, pode-se estabelecer a vida útil, a data de validade, as condições de armazenamento e os intervalos de amostragem/testagem.
Tabela 1. A frequência de testes nos estudos de estabilidade a longo prazo de biológicos pré-aprovação
| Prazo de validade |
Intervalos de teste |
Pontos de tempo |
| 1 ano ou menos |
Mensalmente nos primeiros 3 meses;
A cada 3 meses posteriormente
|
Nos meses 0, 1, 2, 3, 6, 9 e 12 |
| Mais de 1 ano |
A cada 3 meses durante o primeiro ano;
A cada 6 meses durante o segundo ano;
Anualmente depois disso
|
Aos 0, 3, 6, 9, 12, 18, 24, 36 meses e anualmente depois disso |
Estudos de Estabilidade Acelerada
A temperatura de armazenamento recomendada para biofármacos injetáveis geralmente está entre 2 e 8℃. Estudos de estabilidade acelerada são realizados com duração mais curta sob condições aceleradas, como alta temperatura. Os dados de estabilidade são reconhecidos como informações de suporte para a estabilidade do produto e amplamente utilizados na determinação da vida útil e da data de validade, bem como no desenvolvimento de formulações.
Tabela 2. Exemplos de Estudos de Estabilidade Acelerada
| Estudos de Estabilidade |
Condições aceleradas |
Pontos de amostragem |
| Estudos de Estabilidade Acelerada |
temperatura elevada
umidade Relativa
|
Aos 0, 1, 2, 3, 6 meses |
Estudos de Degradação Forçada
O objetivo dos estudos de degradação forçada é coletar informações de estabilidade sob condições de estresse, como altas temperaturas, umidade, luz, oxidação, congelamento-descongelamento ou estresse mecânico (agitação, cisalhamento). Estudos de degradação forçada da substância medicinal ou do produto farmacêutico em condições extremas podem ajudar a identificar fatores-chave/parâmetros que levam à degradação de biológicos. Esses dados são úteis para a avaliação de robustez da formulação e do processo de fabricação.
Tabela 3. Exemplos de Estudos de Degradação Forçada
| Estresse |
Condições de estresse |
Tempo de duração |
| Temperatura |
Alta temperatura (ex., 25℃, 30℃, 37℃, 40℃) |
Dias-meses |
| Umidade |
Umidade relativa (0~100%) |
Dias-meses |
| Luz |
Mínimo de 1,2 milhão de lx h e 200 W h/m2 |
Vários dias |
| Congelamento-descongelamento |
congelo–descongelamento (de -20℃, -80℃ para 15℃) |
1~5 ciclos |
| Agitação, misturando |
50~500 rpm |
Horas-dias |
Métodos Analíticos de Apoio a Estudos de Estabilidade
| Atributos Críticos de Qualidade (CQAs) |
Métodos Analíticos |
| Conteúdo total de proteína |
UV, BCA, Bradford, Lowry |
| Partículas visíveis |
Inspecção visual |
| Agregação, fragmentos |
Difração de luz dinâmica Cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) HPLC/UPLC, Eletroforese capilar CE (CGE, CZE, cIEF/iCIEF), SDS-PAGE não redutora |
| Mapeamento e sequenciamento de peptídeos |
LC-MS/MS |
| Ligações de Disulfeto |
LC-MS/MS |
| PTM (oxidação, isomerização, desaminação, glicosilação) |
LC-MS/MS |
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