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Preparação de Proteína sem Tag

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Microbial CDMO

Preparação de Proteína sem Tag

Tags de proteína, como parceiros de fusão usados em tecnologias de DNA recombinante, permitem a purificação por afinidade em uma única etapa eficaz para várias proteínas/peptídeos com diferentes características. Apesar dessa importante vantagem, tags como aminoácidos exógenos podem alterar a estrutura da proteína e suas funções biológicas. Portanto, proteínas ou peptídeos sem tag são mais preferidos para garantir segurança e eficácia, especialmente no campo biofarmacêutico. Uma proteína recombinante com uma tag de fusão tem possibilidades limitadas de obter autorização de agências médicas/administração de medicamentos.

Com base na plataforma de P&D de biológicos microbianos, a Yaohai Bio-Pharma oferece serviços personalizados de preparação de proteínas sem tag dedicados a atender objetivos únicos para pesquisa, desenvolvimento e fabricação para uso clínico.

Palavras-chave: produção de proteína livre de tags, purificação de proteína sem tag, preparação de proteína baseada em tag livre, expressão e purificação de proteína sem tag, proteína alvo altamente livre de tags

Aplicação: pesquisa de medicina humana, desenvolvimento de medicina animal, desenvolvimento de vacinas recombinantes, produção de biológicos de moléculas grandes recombinantes

Nossa Plataforma de P&D Microbiana

Temos experiência em engenharia de cepas microbianas, fermentação e purificação de produtos.

Bactérias: Escherichia coli (E. coli)

Levedura: Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha)

Opções Personalizadas
Modalidade Proteína Recombinante
Materiais Iniciais Sequências de genes, plasmídeo recombinante ou cepas engenheiradas
Entregáveis Purificar: ＞80%, ＞85%, ＞90% Quantidade: 0,2~10 g (a ser determinado pelo projeto)
Sistema de Expressão e Formação

E. coli secreção periplasmática, expressão solúvel e corpo de inclusão;

Expressão intracelular ou secreta de levedura

Métodos de análise Ultravioleta (UV), ensaio de ácido bicinconínico (BCA), Bradford ou Lowry para Quantidade
Eletroforese em gel de poliacrilamida com sulfato de dodecila de sódio (SDS-PAGE) para teste de purificação
Opcional: blot ocidental (WB), ensaio imunoenzimático ligado (ELISA), cromatografia líquida de alta performance (HPLC)
Impurezas residuais Endotoxina (opcional)
Detalhes do Serviço

Serviços

Detalhes do Serviço

Prazo Mínimo (dia útil)

Síntese de genes

Otimização de codons para hospedeiro de expressão específico

7 a 10 dias

Síntese de genes

Construção de plasmídeo/vetor

Clonagem em plasmídeo/vetor

2 dias

Transformação de plasmídeo

Verificação por reação em cadeia da polimerase (PCR), digestão por enzima de restrição, sequenciamento do gene

3 dias

Expressão de proteína em E. coli

Transformação de plasmídeo,

2 dias

Cultivo em balão agitado

3 dias

fermentação em escala de 7L, otimização

4 dias/lote

Purificação de proteína sem tag, otimização

5~10 dias/lote

Teste por eletroforese em gel de poliacrilamida com sulfato de dodecila de sódio (SDS-PAGE)

Expressão de proteína em levedura

Preparação de células competentes de levedura

4 dias

Linearização de plasmídeo e eletro-transformação

fermentação em escala de 7L, otimização

5 dias

Purificação de proteína sem tag, otimização

7 dias/lote

Purificação de proteína sem tag

5~10 dias/lote

Controle de qualidade por SDS-PAGE

Serviços Adicionais (Opcionais)
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