As ligações de disulfeto são às vezes chamadas de ligações S-S ou pontes de disulfeto. As pontes de disulfeto afetam a bioatividade de biológicos, como peptídeos, proteínas e anticorpos.
A Yaohai Bio-Pharma oferece serviços de análise de ligações de disulfeto baseados principalmente em Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massa (LC-MS).
Estivemos envolvidos na Caracterização Estrutural de Proteínas de várias grandes moléculas, incluindo Vacinas Recombinantes de Subunidades, Nanocorpos/VHHs/ Anticorpos de Domínio Único (sdAbs), Fragmentos de Anticorpos, Hormônios/Peptídeos, Citocinas, Fatores de Crescimento (GF), Enzimas, Colágenos, etc.
Requisitos Regulatórios para Ligações de Disulfeto
Existem diferentes números e formações de pontes de disulfeto em diferentes biológicos, os quais devem ser plenamente avaliados durante os estudos de caracterização de proteínas se a sequência primária de aminoácidos esperada do produto contiver o aminoácido cisteína. Isso também é exigido pelo documento regulatório ICH Tópico Q6B.
Métodos Analíticos
Análise |
Métodos |
Ligações de Disulfeto |
Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massa (LC-MS) após digestão |
Para os dados necessários para a avaliação completa dos pontes dissulfídricas e tióis livres, cientistas da Yaohai Bio-pharma realizam mapeamento peptídico pós-digestão com uma protease específica. Em seguida, analisam usando LC/Eletrospray Ionização Espectrometria de Massa (ES-MS) e/ou LC/ES-MS/MS antes e após a redução.
A Yaohai Bio-pharma também pode realizar o teste de Ellman, que é uma parte importante de qualquer avaliação completa de produtos contendo Cisteína. Dentro do teste de Ellman, derivatizamos os sulfidrilos usando (5,5’-ditiobis-[2-nitrobenzoato]). Para determinar os níveis de tióis livres, o produto resultante é analisado por espectrofotometria UV a 412nm.