A ocupação do sítio de N-glicosilação é uma característica fisiológica das glicoproteínas e produz principalmente N-glicanas. O serviço de análise de ocupação do sítio de N-glicosilação da Yaohai Bio-Pharma é realizado através de digestão, liberação, enriquecimento e análise utilizando Cromatografia Líquida-Eletrospray Ionização Espectrometria de Massa-Espectrometria de Massa (LC-ESI-MS/MS).
Estivemos envolvidos na Caracterização Estrutural de Proteínas de várias grandes moléculas, incluindo Vacinas Recombinantes de Subunidades, Nanocorpos/VHHs/ Anticorpos de Domínio Único (sdAbs), Fragmentos de Anticorpos, Hormônios/Peptídeos, Citocinas, Fatores de Crescimento (GF), Enzimas, Colágenos, etc.
Requisitos Regulatórios para Ocupação do Sítio de N-glicosilação
De acordo com a diretriz ICH Q6B, “para glicoproteínas, o teor de carboidratos (açúcares neutros, amino açúcares e ácidos siálicos) é determinado. Além disso, a estrutura das cadeias de carboidratos, o padrão de oligossacarídeos (perfil antenar) e os sítios de glicosilação da cadeia polipeptídica são analisados na medida do possível.”
Método Analítico
| Análise |
Métodos |
| Ocupância do Sítio de N-glicosilação |
LC-MS após digestão por deglicosidase e protease |
Procedimentos
1. Digestão de proteínas para gerar pequenos fragmentos de peptídeos.
2. Liberação de N-glicanas usando endoglicosidase H ou PNGase F. A endoglicosidase H quebra o vínculo entre os dois resíduos de GlcNAc no núcleo das glicanas N-ligadas, enquanto a PNGase F é uma glicoamidase que rompe o vínculo entre GlcNAc e Asn, liberando toda a cadeia de açúcar e convertendo Asn em Asp com aumento de massa de 1-Da.
3. Enriquecimento de N-glicopeptídeos via HILIC (Cromatografia Líquida de Interação Hidrofílica)
4. Análise da ocupação do sítio de glicosilação N-ligada usando LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
