A desamidação das cadeias laterais de glutamina e asparagina é uma modificação comum em termos de impacto nas propriedades de produtos biofarmacêuticos proteicos. A desamidação pode ocorrer em resíduos de glutamina, mas geralmente a uma taxa muito menor. As taxas de desamidação são influenciadas pela temperatura, pH, estrutura proteica local e resíduos de aminoacil flanqueadores.
Yaohai BioPharma oferece serviço de teste de desamidação de aminoácidos, que permite detectar a desamidação de aminoácidos por cromatografia líquida-espectrometria de massa (LC-MS).
Estamos envolvidos na caracterização estrutural de proteínas de várias moléculas grandes, incluindo vacinas de subunidades recombinantes, nanocorpos/VHHs/anticorpos de domínio único (sdAbs), fragmentos de anticorpos, hormônios/peptídeos, citocinas, fatores de crescimento (FC), enzimas, colágenos, etc.
Requisitos regulatórios para desamidação de aminoácidos
De acordo com as diretrizes Q6B do ICH, as formas desamidadas podem ser detectadas e caracterizadas por métodos cromatográficos, eletroforéticos e/ou outros métodos analíticos relevantes.
Métodos analíticos
| Análise |
De Depósito |
| Desamidação |
Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massa (LC-MS) |
Procedimentos
por exemplo, deamidação aspártica
1. Digestão enzimática
2. LC-MS sob a condição de cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC)
3. Análise de dados
A desamidação da asparagina ocorre através de um intermediário succinimida (Suc), que é suscetível à racemização e hidrólise, produzindo quatro isômeros Asp, incluindo L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp e D-IsoAsp.
Em teoria, a desamidação de Gln poderia gerar quatro isômeros Glu correspondentes através de um processo semelhante à desamidação de Asn.
A espectrometria de massa de alta resolução identifica facilmente a diferença de massa de 1-Da entre os peptídeos contendo Asn/Gln e seus correspondentes desamidados Asp/Glu.
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