Síntese personalizada de saRNA
MRNA autoamplificante (saRNA), também conhecido como RNA replicon, codifica sequências de mRNA de transcrição in vitro (IVT) e genes de replicase viral derivados de alfavírus ou flavivírus. Os genes de replicase viral permitem a autoamplificação do mRNA, o que resulta em maior expressão de proteínas e uma dose mínima de RNA necessária em comparação com mRNAs não amplificantes. Outro aspecto é que o saRNA é uma molécula relativamente grande (mais de 14 kb).
A Yaohai Bio-Pharma desenvolveu um conjunto de tecnologias de síntese de mRNA para fornecer mRNA não amplificante e mRNA autoamplificante (1000 nt~14000 nt), como design e otimização de sequências, IVT, purificação, liofilização e encapsulamento em nanopartículas lipídicas (LNP). Todos os produtos são liberados sob padrões rigorosos de controle de qualidade.
Fig.1 Características Estruturais de mRNAs IVT: Convencional, Circular e Autoamplificante.
Características de Sequência de mRNA Autoamplificante
O RNA autoamplificante compreende quatro proteínas não estruturais (designadas como nsP1, nsP2, nsP3 e nsP4), que são derivadas de alfavírus, vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV). Entre essas, a nsP1 exibe atividades enzimáticas duplas, nomeadamente GTase e N7MTase, enquanto a nsP2 possui atividade RTPase, crucial para a formação da estrutura Cap 0 do mRNA IVT. Além disso, a nsP2 atua como uma protease e helicase, facilitando o processamento intricado de todo o complexo nsP. A função precisa da nsP3 permanece nebulosa, embora ela interaja com várias proteínas da célula hospedeira, contribuindo para a atenuação da resposta antiviral desencadeada pelo hospedeiro.
Uma região de promotor subgenômico (SGP) do alphavirus está localizada antes do gene de interesse (GOI). O elemento SGP facilita o início da transcrição do GOI, bypassando a leitura da sequência que codifica as proteínas nsP virais.
Fig.2 Síntese e ensaios celulares do saRNA de eGFP da Plataforma RNASci da Yaohai Bio-Pharma.
Soluções Personalizadas de saRNA
O protocolo de síntese do saRNA é semelhante ao do mRNA: Síntese de mRNA Personalizada
- Design de Sequência
- Preparação do Plasmídeo Modelo
- transcrição in vitro (IVT)
- tampão Enzimático de mRNA
- tampão Co-transcricional de mRNA
- purificação de mRNA
- liofilização de mRNA
- Encapsulamento em LNP
- Análise e Testes
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