Síntese de saRNA personalizada
O mRNA autoamplificador (saRNA), também conhecido como RNA replicon, codifica sequências de mRNA de transcrição in vitro (IVT) e genes de replicase viral derivados de alfavírus ou flavivírus. Os genes da replicase viral permitem a autoamplificação do mRNA, o que resulta no aumento da expressão proteica e em uma dose mínima necessária de RNA em comparação com mRNAs não amplificadores. Outro aspecto é que o saRNA é uma molécula relativamente grande (mais de 14 kb).
A Yaohai Bio-Pharma estabeleceu um conjunto de tecnologias de síntese de mRNA para fornecer mRNA não amplificador e mRNA autoamplificador (1000 nt ~ 14000 nt), como design e otimização de sequência, IVT, purificação, liofilização e encapsulamento de nanopartículas lipídicas (LNP). . Todos os produtos são lançados sob rigorosos padrões de controle de qualidade.
Fig.1 Características estruturais dos mRNAs de IVT: mRNA convencional, circular e autoamplificador.
Características de sequência de mRNA autoamplificador
O RNA autoamplificador compreende quatro proteínas não estruturais (designadas como nsP1, nsP2, nsP3 e nsP4), que são derivadas de alfavírus, vírus da encefalite equina venezuelana (VEEV). Entre estes, o nsP1 exibe atividades enzimáticas duplas, nomeadamente GTase e N7MTase, enquanto o nsP2 possui atividade RTPase, fundamental para cobrir o mRNA IVT para gerar a estrutura Cap 0. Além disso, o nsP2 serve como protease e helicase, facilitando o intrincado processamento de todo o complexo nsP. A função precisa do nsP3 permanece indefinida, mas envolve interações com diversas proteínas da célula hospedeira, contribuindo assim para a atenuação da resposta antiviral montada pelo hospedeiro.
Uma região do promotor subgenômico do alfavírus (SGP) está localizada antes do gene de interesse (GOI). O elemento SGP facilita o início da transcrição GOI, ignorando a leitura da sequência que codifica as proteínas nsP virais.
Fig.2 Síntese e ensaios celulares de saRNA eGFP da plataforma Yaohai Bio-Pharma RNASci.
Soluções personalizadas de saRNA
O protocolo de síntese do saRNA é semelhante ao mRNA: Síntese de mRNA personalizada
- Projeto de Sequência
- Preparação de modelo de plasmídeo
- transcrição in vitro (IVT)
- Capeamento Enzimático de mRNA
- Limite de co-transcrição de mRNA
- Purificação de mRNA
- Liofilização de mRNA
- Encapsulamento LNP
- Análise e Teste
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