O capeamento da extremidade 5' é uma modificação essencial do mRNA. Os mRNAs com estruturas cap, especialmente estruturas Cap1, facilitam que os mRNAs evitem as respostas imunes inatas in vivo, resultando em uma tradução eficiente de proteínas.
O capeamento enzimático (o método de duas etapas) é o método convencional de capeamento de mRNA, semelhante ao processo de capeamento em organismos eucarióticos. Sob a ação de uma série de enzimas, a 7-metilguanina (m7G) está ligada à extremidade 5' do mRNA através de uma ligação trifosfato 5'-5' e sofre modificação de metilação para formar a estrutura cap Cap 1 (m7GpppN).
Diagrama da formação natural da estrutura da tampa
O fluxo da reação de tamponamento enzimático é o seguinte:
O DNA plasmídico linearizado é usado como modelo para transcrição in vitro (IVT) na presença de polimerase T7, e o mRNA com uma estrutura de extremidade 5' é formado após uma purificação em uma etapa usando a enzima de capeamento de vaccinia e 2'-O -metiltransferase.
Detalhes dos serviços
Serviço Opcional |
Detalhes de serviços |
Período de entrega (dia) |
Capeamento enzimático de mRNA |
Reação de capeamento enzimático |
1 |
Otimização da reação de limitação - opcional |
Projeto e otimização de componentes de reação |
3 7 ~ |
Nossos recursos
- Projeto e otimização do componente de reação de nivelamento
O componente da reação de cobertura é otimizado e a produção de transcrição de mRNA é bastante aumentada.
- Verificação de expressão in vitro
O mRNA capeado é transfectado em células 293T e a expressão da proteína alvo pode ser detectada.
- Controle rigoroso de RNase
Através do controle rigoroso do ambiente experimental e dos consumíveis do RNaseson, a degradação do mRNA é efetivamente evitada.
Estudo de caso
A plataforma de mRNA da Yaohai Bio-Pharma construiu um processo de reação de nivelamento perfeito.
Para o mRNA de eGFP, um pré-produto de mRNA preparado por capeamento enzimático, um sinal de fluorescência de eGFP (fluorescência verde) em alto nível pode ser observado após a transfecção de células 293T por 24 horas, que é detectado por Western Blot (WB), demonstrando que o proteína fluorescente verde aprimorada com proteína alvo (eGFP) pode ser expressa eficientemente in vitro.
Expressão de mRNA de eGFP com tampa enzimática em células 293T
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