Com relação à preparação em lote de pré-reagentes de RNA, um método comumente usado é a transcrição in vitro (IVT). A reação IVT utiliza DNA plasmídico linearizado contendo o promotor T7 como template e sintetiza um pré-reagente de RNA com trifosfatos de nucleosídeos (NTPs) como substrato na presença da polimerase RNA T7.
Métodos de ciclagem in vitro incluem ligação química, ligação enzimática e o método permuted intron-exon (PIE). A ligação química e a ligação enzimática são adequadas para a ciclagem de RNAs mais curtos. Quando o fragmento é maior que 100 nt, a taxa de ciclagem diminuirá consideravelmente. Em contraste, o método baseado no sistema PIE pode alcançar a ciclagem de sequências de 8 kb.
Sob a catalise do guanósio trifosfato (GTP), a estrutura PIE sofre ciclização de sequências extrínsecas ao intrão. Combinado com uma estratégia razoável para aumentar a taxa de ciclização, a Yaohai Bio-Pharma pode alcançar ciclização de sequências de até 4 kb, com uma eficiência de ciclização superior a 80%.
A reação de ciclização in vitro do RNA ocorre da seguinte forma:
O precursor do RNA é sintetizado por transcrição in vitro, e o componente PIE completa a autossplagem sob a catalise do GTP para formar circRNA.
Detalhes dos Serviços
| Processo |
Detalhes do Serviço |
Prazo de Entrega (dia útil) |
| Transcrição in vitro e Circulação |
Confirmação do sistema de reação |
1-2 |
| Reações de Transcrição in Vitro e Ciclização |
| Digestão com RNase R |
| Otimização da reação |
Composição da Reação, Otimização de Tempo |
2-5 |
Nossos Recursos
- Design Rigoroso de Testes e Otimização
Até 4 kb de ciclização de RNA podem ser alcançados.
- Alta eficiência de ciclização
Uma taxa de ciclização superior a 80% pode ser alcançada por meio de uma estratégia racional de otimização de sequência.
- Controle rigoroso de RNase
Por meio de um controle rigoroso das RNases no ambiente experimental e nos materiais de consumo, a degradação do RNA é eficazmente prevenida.
Estudo de Caso
Ciclização e enriquecimento in vitro de circRNA
Com base no sistema PIE, a Yaohai Bio-Pharma otimizou a sequência do circRNA, com uma taxa de ciclização superior a 80% por eletroforese em gel de agarose (AGE). Usando RNase R para enriquecer o circRNA, os resultados da eletroforese E-gel mostram que o precursor de RNA linear é digerido, e após purificação adicional, a maior parte do circRNA nicked pode ser removida. A solução de purificação foi desenvolvida internamente pela Yaohai Bio-Pharma.
Circulação e enriquecimento in vitro de circRNA
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