Em comparação com o método de capping enzimático em duas etapas, o método de co-transcrição em uma etapa pode reduzir significativamente o fluxo do processo. O método é orientado para o resultado e envolve a adição de análogos de cap à reação de transcrição in vitro (IVT). Os análogos de cap podem ser introduzidos no início da transcrição, e mRNA com estrutura de cap pode ser obtido ao final da transcrição. Os atuais análogos de cap de terceira geração podem evitar o capping reverso e adicionar diretamente a estrutura Cap 1 ao produto da transcrição.
Para considerações sobre a imunogenicidade in vivo do mRNA e a eficiência de tradução, o processo IVT frequentemente utiliza certos tipos de NTPs modificados, e os nucleotídeos modificados mais comuns são pseudouridina (Ψ), N1-metil-pseudouridina (N1Ψ) e citosina-5-metil (5mC).
Figura: Diagrama da Reação de Co-transcrição e Capping do mRNA
Detalhes do Serviço
Serviço |
Detalhes do Serviço |
Prazo de Entrega (dia útil) |
Co-transcrição de capping |
Resposta transcricional in vitro (análogo de Clean Cap) |
1-2 |
| Modificações de nucleotídeos (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Remoção do template de DNA (DNAse I) |
Otimização da condição IVT - opcional |
Design e otimização dos componentes da reação |
3-7 |
Nossos Recursos
- Estratégias Diversificadas de Modificação de Nucleotídeos
Várias estratégias opcionais de modificação de nucleotídeos podem melhorar a expressão de proteínas.
- Sistema de Reação Otimizado
Alcançar uma alta taxa de transcrição e alta eficiência de capping.
- Processo de Capping Estável
Alcance uma taxa de tampão de mais de 95%.
- Controle rigoroso de RNase
Previna a degradação do mRNA eficazmente controlando estritamente a RNase no ambiente experimental e nos materiais de consumo.
Estudo de Caso
A Yaohai Bio-Pharma desenvolveu uma plataforma madura para o processo de tampão co-transcricional, utilizando análogos limpos de cap para adicionar diretamente a estrutura Cap1, evitando ao mesmo tempo o tampão reverso. Após o pré-tratamento padronizado da amostra e a detecção por eletroforese capilar (CE), a taxa de tampão do mRNA de proteína fluorescente verde aprimorada (eGFP) pode atingir mais de 95%.
eficiência de tampão do mRNA de eGFP superior a 95%
Os mRNAs de eGFP e mCherry preparados por tampão co-transcricional são transfetados em células 293T, respectivamente, e um sinal fluorescente forte é observado após 48h, sugerindo que o mRNA é expresso de forma eficiente nas células 293T.
Expressão dos mRNAs de eGFP e mCherry na Célula 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
