A preparação de CircRNA requer RNA linear como material precursor (RNA precursor) para ciclização, onde o RNA precursor geralmente é preparado usando DNA plasmidial linearizado como modelo de transcrição e transcrito in vitro com a ajuda da polimerase T7 RNA.
Um DNA plasmidial de alta qualidade é essencial para a transcrição in vitro (IVT). Com base na plataforma madura de serviço de preparação de plasmídeos, a Yaohai Bio-Pharma pode fornecer um serviço de preparação de DNA plasmidial linearizado (pDNA) de alta pureza e padrão para garantir a integridade dos produtos IVT.
Detalhes dos Serviços
| Processo |
Serviço Opcional |
Detalhes do Serviço |
Prazo de Entrega (dia útil) |
| Preparação de Plasmídeo Circular |
Síntese de genes |
Síntese de Gene (Terceiros) |
7 a 10 |
| Amplificação de Plasmídeo |
Amplificação de Plasmídeo |
2 |
| Extração de Plasmídeo |
| Preparação de Plasmídeo Linearizado |
Linearização e purificação de plasmídeos |
Linearização de plasmídeo |
1 |
| Purificação de DNA Linearizado |
| Controle de qualidade do DNA de plasmídeo |
Concentração e pureza |
Espectrofotometria Ultravioleta (UV) |
1-2 |
| Conformação de plasmídeo |
Eletroforese em Gel de Agarose (AGE) |
| Eletroforese Capilar (CE) - Opcional |
| Identificação de Plasmídeo |
Identificação de enzima de restrição/AGE |
Nossos Recursos
- Template de Plasmídeo Freecut
Seleção flexível de métodos de linearização
Otimização dos métodos de extração e purificação de DNA para alcançar altas taxas de recuperação.
- Controlo de qualidade rigoroso
Padrões rigorosos de controle de processo, com uma taxa de conformação super-helicoidal de amostras de plasmídeos para pesquisa de mais de 80%.
- Processo de Plataforma Madura
Serviços de preparação e controle de qualidade de plasmídeos de alto padrão e alta eficiência para atender às necessidades experimentais.
Estudo de Caso
Tome-se como exemplo o produto mCherry circRNA da Yaohai Bio-Pharma, a proporção de superespiralização das amostras de plasmídeo de molde de transcrição (grau de pesquisa) é superior a 70%, com uma taxa de linearização próxima de 100%.
o mCherry circRNA é preparado utilizando o plasmídeo linearizado como molde e é transfetado em células 293T. Detecta-se uma expressão elevada de fluorescência (fluorescência vermelha) após 24 horas de transfecção, que será intensificada após 48 horas, e ainda pode ser detectada no 7º e no 14º dia após a transfecção.
a expressão do proteína mCerry é estável e eficiente, e a pureza do molde transcricional pode atender ao requisito do produto farmacêutico circRNA (DP) de alta qualidade.
Validação da expressão in vitro do mCherry circRNA
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