A preparação de CircRNA requer RNA linear como material precursor (precursor de RNA) para ciclização, onde o precursor de RNA é geralmente preparado usando DNA plasmídico linearizado como modelo de transcrição e transcrito in vitro com a ajuda de RNA polimerase T7.
DNA plasmídico de alta qualidade é essencial para a transcrição in vitro (IVT). Com base na plataforma de serviço de preparação de plasmídeo maduro, a Yaohai Bio-Pharma pode fornecer um serviço de preparação de DNA de plasmídeo linearizado padrão (pDNA) de alta pureza para garantir a integridade dos produtos IVT.
Detalhes dos serviços
| Extração | Serviço Opcional | Detalhes de serviços | Período de entrega (dia útil) |
| Preparação de plasmídeo circular | Síntese genética | Síntese genética (terceiros) | 7-10 |
| Amplificação de plasmídeo | Amplificação de plasmídeo | 2 |
| Extração de plasmídeo |
| Preparação de plasmídeo linearizado | Linearização e purificação de plasmídeos | Linearização de plasmídeo | 1 |
| Purificação de DNA de linearização |
| Controle de qualidade do DNA plasmidial | Pureza de concentração | Espectrofotometria ultravioleta (UV) | 1-2 |
| Conformação plasmidial | Eletroforese em gel de agarose (AGE) |
| Eletroforese capilar (CE) - opcional |
| Identificação do plasmídeo | Identificação de enzimas de restrição/IDADE |
Nossos recursos
- Plasmídeo de modelo de corte livre
Seleção flexível de métodos de linearização
Otimização dos métodos de extração e purificação de DNA para atingir altas taxas de recuperação.
- Controle de qualidade rigoroso
Padrões rigorosos de controle de processo, com uma taxa de conformação superhelicoidal de amostras de plasmídeos para pesquisa superior a 80%.
- Processo de plataforma madura
Serviços de preparação de plasmídeos e controle de qualidade de alto padrão e alta eficiência para atender às necessidades experimentais.
Estudo de caso
Tomando como exemplo o produto mCherry circRNA da Yaohai Bio-Pharma, a proporção superenrolada de amostras de plasmídeo de modelo de transcrição (grau de pesquisa) é superior a 70%, com uma taxa de linearização próxima de 100%.
O circRNA mCherry é preparado com plasmídeo linearizado como modelo e transfectado em células 293T. Alto nível de expressão de fluorescência (fluorescência vermelha) é detectado após 24 horas de transfecção, que será aumentado após 48 horas, e ainda pode ser detectado no 7º dia e no 14º dia após a transfecção.
A proteína mCherry é expressa de forma estável e eficiente, e a pureza do modelo transcricional pode atender aos requisitos do medicamento circRNA (DP) com alta qualidade.
Validação de expressão in vitro de mCherry circRNA
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