Proteazy pro odstranění tagu
Pro zvýšení rozpustnosti a zjednodušení procesu čištění rekombinantních bílkovin vědci obvykle přidávají fúzní tagy, z nichž His-tag, maltózové vázané bílko (MBP) a glutathion-S-transferáza (GST) jsou běžně používané.
I když je tag přidaný jako dodatečná sekvence bílkoviny, měl by být odebrán, aby se udržela biologická aktivita v farmaceutickém průmyslu. Odstranění fúzních tagů vyžaduje proteázy s lokálním působením, jako jsou enterokináza (EK), trombin, proteáza tabákového rozličného viru (TEVp), lidská rhinoviróza 3C (HRV3C), malá ubiquitinová modifikující bílkovina (SUMO) proteáza, tabákový žilnatý mazlavý virus (TVMV) proteáza a karboxypeptidáza A/B (CPA/CPB).
Typ
|
Enzym
|
Poznávací místo
|
Endoproteázy pro odstranění tagu
|
Enterokináza (EK), enteropeptidáza
|
DDDDK↓
|
Thrombin
|
LVPR↓GS
|
TEV proteáza
|
ENLYFQ↓G
|
HRV3C proteáza
|
LEVLFQ↓GP
|
SUMO proteáza
|
Terciární struktura SUMO
|
TVMV proteáza
|
ETVRFQG↓S
|
Exoproteázy pro odstranění tagu
|
Karboxypeptidáza A (CPA)
|
C-terminální aminokyseliny, s výjimkou Pro, Lys a Arg
|
Karboxypeptidáza B (CPB)
|
C-terminální Lys a Arg
|
Ostatní proteázy
Aplikace
|
Enzym
|
Funkce
|
Ostatní proteázy
|
Proteáza K
|
Serinová proteáza, která tráví bílkoviny hydrolyzí po peptidových vazbách.
|
IdeS, IgG proteáza
|
Enzymy degradující IgG (Ides), které štěpí na konkrétním místě imunoglobulinu G (IgG), vytvářející Fab a Fc fragmenty
|
IgA1 proteáza
|
Proteolytický enzym, který štěpe konkrétní místo v sekvenci spojovací oblasti lidské imunoglobuliny A1 (IgA1).
|
Nukleáza
Aplikace
|
Enzym
|
Funkce
|
Nukleáza
|
Nukleáza
|
Štěpí nukleové kyseliny (DNA nebo RNA) hydrolyzí fosfodiesterových vazeb.
|
Restrikční enzym
|
Endonukleáza, která štěpí DNA na nebo poblíž konkrétních míst.
|
Amidáza
Aplikace
|
Enzym
|
Funkce
|
Amidáza
|
PNGase F
|
Štěpe mezi nejvnitřnějším GlcNAc a rezidui asparaginu v oligosacharidech s vysokým manosem, hybridními a komplexními.
|
Yaohai Bio-Pharma nabízí kompletní CDMO řešení pro enzymatické reagenty