Cirkulární mRNA (circRNA) byla široce používána při studiu funkcí genů nebo proteinů. Mezitím je populární ve vývoji profylaktických a terapeutických biologických látek, podobně jako mRNA.
Yaohai Bio-Pharma vytvořila sadu technologií syntézy circRNA, které poskytují vysoce kvalitní RNA, jako je sekvenční návrh a optimalizace, in vitro transkripce (IVT), cirkularizace/cyklizace, purifikace a zapouzdření lipidových nanočástic (LNP). Všechny produkty podléhají přísným standardům kontroly kvality (QC).
Ve srovnání s lineární mRNA je kruhová RNA (circRNA) stabilnější ve struktuře a je hlavním horkým místem v současném výzkumu léků na bázi nukleových kyselin. Má širokou škálu aplikací v různých oblastech, ať už jako kódující circRNA nebo nekódující circRNA, včetně profylaktických vakcín pro infekční onemocnění, terapeutických onkologických vakcín, terapeutických onkologických léků, proteinové substituční terapie, regenerativní medicíny, buněčné a genové terapie (CGT) role molekulární houby a RNA aptamer.
Proces | Volitelná služba | Podrobnosti služby | Dodací lhůta (den) |
Návrh a optimalizace sekvence circRNA | Návrh a optimalizace kódovacích sekvencí | CDS optimalizace kodonů | 1 |
Návrh a optimalizace nekódovacích sekvencí | Sekvence intronů a exonů, návrh a optimalizace homologního ramene a spaceru | 1-2 | |
Příprava cirkulárního plazmidu | Genová syntéza | Genová syntéza (třetí strana) | 7-10 |
Amplifikace plazmidu | Amplifikace plazmidu | 2 | |
Extrakce plazmidu | |||
Příprava linearizovaného plazmidu | Linearizace a čištění plazmidu | Linearizace plazmidu | 1 |
Linearizace Purifikace DNA | |||
In vitro transkripce a cyklizace | In vitro transkripce a cyklizace | In vitro transkripční a cyklizační reakce | 1-2 |
RNase R trávení | |||
Optimalizace – volitelná | Složení reakce, optimalizace času | 2-5 | |
Purifikace circRNA | Konvenční metoda čištění | Srážení chloridu lithného | 1 |
Čištění magnetických kuliček | 1 | ||
Vysoce čistá purifikace circRNA | Preparativní vysoce výkonná kapalinová chromatografie (HPLC) | 1-2 | |
Výměna vyrovnávací paměti | Ultrafiltrace | 1 | |
Lyofilizace circRNA | Vzorová náplň | Náplň | 2-3 |
Lyofilizace | Předmražení | ||
Primární sušení (sublimace) | |||
Sekundární sušení (desorpce) | |||
Zapouzdření circRNA-LNP | Zapouzdření LNP | Předúprava materiálu a kapalin | 2 |
Mikrofluidní míchání zařízení | |||
Výměna vyrovnávací paměti | Filtrace tangenciálního toku | 1 | |
Sterilizovat | filtrace | ||
Kontrola kvality plazmidové DNA | Koncentrace/čistota | Ultrafialová (UV) spektrofotometrie | 1-2 |
Plazmidová konformace | Elektroforéza v agarózovém gelu (AGE) | ||
Kapilární elektroforéza (CE) – volitelná | |||
Identifikace plazmidu | Identifikace omezovacího enzymu/VĚK | ||
Kontrola kvality circRNA | Koncentrace/čistota | Ultrafialová (UV) spektrofotometrie | - |
Čistota | Elektroforéza v agarózovém gelu (AGE)/E-gel | 0.5 | |
HPLC - volitelně | 1 | ||
Kontrola kvality circRNA-LNP | Účinnost zapouzdření | RiboGreen metoda | 1 |
Velikost částic | Dynamický rozptyl světla (DLS) | 1 | |
Index polydisperzity | Dynamický rozptyl světla (DLS) | 1 | |
Potenciál Zeta | Dynamický rozptyl světla (DLS) | 1 | |
Buněčný test potence | Buněčná transfekce | Pokovování buněk, transfekce buněk | 4 |
Detekce cílových proteinů | Fluorescenční pozorování, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Transfekovali jsme zesílený zelený fluorescenční protein circRNA (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferázovou circRNA do buněk 293T a detekovali jsme cílový protein pomocí fluorescence, luminiscenčního nebo barevného signálu, western blotu (WB), enzymatické imunoanalýzy (ELISA).
Buněčné testy potence vzorků circRNA od Yaohai Bio-Pharma