Kruhová mRNA (circRNA) se široce používá při studiu funkcí genu nebo bílkoviny. Zároveň je populární v rozvoji preventivních a léčebných biologických látek, podobně jako mRNA.
Yaohai Bio-Pharma vyvinula sadu technologií pro syntézu circRNA, které poskytují kvalitní RNA, jako jsou návrh a optimalizace sekvence, in vitro transkripcie (IVT), circularizace/cyklinizace, čištění a encapsulace do lipidových nanocastic (LNP). Všechny produkty jsou uvolněny za přísných standardů kontroly kvality (QC).
Ve srovnání s lineární mRNA je circulární RNA (circRNA) strukturně stabilnější a je hlavním horkým tématem v současné výzkumné oblasti léků z nukleových kyselin. Má širokou aplikaci v různých oborech, ať už jako kodující circRNA nebo nekodující circRNA, včetně preventivních vakcín proti infekčním nemocem, terapeutických onkologických vakcín, terapeutických onkologických léků, terapie nahrazováním proteinů, regenerační medicíny, buněčné a genové terapie (CGT), role molekulárního dřeně a RNA aptamery.
Proces | Volitelná služba | Detaily služby | Doba dodání (den) |
návrh a optimalizace sekvence circRNA | Návrh a optimalizace kodujících sekvencí | Optimalizace kodonů v CDS | 1 |
Návrh a optimalizace nekódovacích sekvencí | Návrh a optimalizace intronových a exonových sekvencí, homologních ramen a spacerů | 1-2 | |
Příprava kruhového plazmidu | Syntéza genu | Syntéza genu (Třetí strana) | 7-10 |
Amplifikace plazmidu | Amplifikace plazmidu | 2 | |
Extrakce plazmidu | |||
Příprava linearizovaného plazmidu | Linearizace a čištění plazmidu | Linearizace plazmidu | 1 |
Očištění linearizované DNA | |||
Transkripcese in vitro a cyklizace | Transkripcese in vitro a cyklizace | Reakce transkripcese in vitro a cyklizace | 1-2 |
Destruckce RNase R | |||
Optimalizace - volitelná | Skladba reakce, optimalizace času | 2-5 | |
čištění circRNA | Konvenční metoda čištění | Konzolidace chloridem litným | 1 |
Čištění magnetickými částicemi | 1 | ||
Vysokoprvosté čištění circRNA | Přípravná vysokorychlostní kapalná chromatografie (HPLC) | 1-2 | |
Výměna.bufferu | Ultrafiltrace | 1 | |
lyofilizace circRNA | Vyplňování vzorku | Výplň | 2-3 |
Lyofilizace | Předzamražení | ||
První fáze sušení (sublimace) | |||
Druhá fáze sušení (desorpce) | |||
encapsulation circRNA-LNP | Encapsulation do LNP | Předzpracování materiálu a kapaliny | 2 |
Míchání v mikrofluidickém zařízení | |||
Výměna.bufferu | Tangenciální toková filtrace | 1 | |
Sterilizovat | Filtration | ||
Kontrola kvality plasmidové DNA | Koncentrace/purity | Ultravioleťová (UV) spektrofotometrie | 1-2 |
Konformace plazmidu | Elektroforeze v agárovém geлу (AGE) | ||
Kapilární elektroforeze (CE) - Volitelné | |||
Identifikace plazmidu | Identifikace restrikčních enzymů/AGE | ||
Kontrola kvality circRNA | Koncentrace/purity | Ultravioleťová (UV) spektrofotometrie | - |
Čistota | Elektroforeze v agárovém geлу (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC - volitelné | 1 | ||
Kontrola kvality circRNA-LNP | Účinnost encapsulace | Metoda RiboGreen | 1 |
Velikost částic | Dynamická světelná difuze (DLS) | 1 | |
Index polydisperze | Dynamická světelná difuze (DLS) | 1 | |
Zeta potenciál | Dynamická světelná difuze (DLS) | 1 | |
Test účinnosti založený na buněčném modelu | Buněčná transfekce | Příprava buněk, buněčná transfekce | 4 |
Detekce cílového proteiny | Fluorescenční pozorování, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Transfektovali jsme opakovanou RNA (circRNA) posilující zelenou fluorescenční protein (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferásovou circRNA do buněk 293T a detekovali jsme cílový protein pomocí fluorescence, luminiscence nebo barevného signálu, western blot (WB), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
Testy účinnosti circRNA vzorků pomocí Yaohai Bio-Pharma