Vlastní syntéza saRNA
Samoamplifikující mRNA (saRNA), také známá jako replikonová RNA, kóduje sekvence mRNA in vitro transkripce (IVT) a geny virové replikázy odvozené z alfaviru nebo flavivirů. Geny virové replikázy umožňují samoamplifikaci mRNA, což vede ke zvýšené expresi proteinu a minimální požadované dávce RNA ve srovnání s neamplifikujícími mRNA. Dalším aspektem je, že saRNA je relativně velká molekula (více než 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma vytvořila sadu technologií syntézy mRNA, které poskytují neamplifikující mRNA a samoamplifikující mRNA (1000 nt~14000 nt), jako je sekvenční návrh a optimalizace, IVT, purifikace, lyofilizace a zapouzdření lipidových nanočástic (LNP). . Všechny produkty podléhají přísným standardům kontroly kvality.
Obr. 1 Strukturní rysy IVT mRNA: Konvenční, kruhová a samoamplifikující mRNA.
Sekvenční rysy samoamplifikující mRNA
Samoamplifikující se RNA obsahuje čtyři nestrukturální proteiny (označené jako nsP1, nsP2, nsP3 a nsP4), které jsou odvozeny z alfavirů, viru venezuelské koňské encefalitidy (VEEV). Mezi nimi nsP1 vykazuje duální enzymatické aktivity, jmenovitě GTázu a N7MTázu, zatímco nsP2 má RTPázovou aktivitu, klíčovou pro překrytí IVT mRNA pro vytvoření Cap 0 struktury. Kromě toho nsP2 slouží jako proteáza a helikáza, což usnadňuje složité zpracování celého komplexu nsP. Přesná funkce nsP3 zůstává nepolapitelná, přesto se zapojuje do interakcí s různými proteiny hostitelské buňky, čímž přispívá k zeslabení antivirové odpovědi hostitele.
Oblast subgenomového promotoru alfaviru (SGP) je umístěna před požadovaným genem (GOI). Element SGP usnadňuje iniciaci transkripce GOI tím, že obchází čtení sekvence kódující virové proteiny nsP.
Obr. 2 Syntéza a buněčné testy eGFP saRNA platformy Yaohai Bio-Pharma RNASci.
Vlastní řešení saRNA
Protokol syntézy saRNA je podobný mRNA: Vlastní syntéza mRNA
- Sekvenční design
- Příprava plazmidové šablony
- in vitro transkripce (IVT)
- mRNA Enzymatic Capping
- Ko-transkripční čepička mRNA
- Purifikace mRNA
- Lyofilizace mRNA
- Zapouzdření LNP
- Analýza a testování
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
