mRNA je široce používána při studiu funkcí genu nebo bílkoviny. Zároveň je běžná při vývoji preventivních a léčebných biologických látek. Jako obvyklá strategie syntézy RNA molekul umožňuje in vitro transkripc (IVT) efektivně získat přizpůsobené transkripty.
Yaohai Bio-Pharma vyvinula sadu technologií pro syntézu mRNA, které poskytují kvalitní RNA, jako jsou návrh a optimalizace sekvence, IVT, čištění, lyofilizace a encapsulace do lipidních nanoparticle (LNP). Všechny produkty jsou uvolňovány za přísných standardů kontroly kvality (QC).
S vypuknutím pandemie COVID-19 v roce 2020 se technologie mRNA rozvíjela obrovskými kroky a její související výzkumy a aplikace získaly nepředstavitelný rozvoj, včetně preventivních vakcín proti infekčním nemocem, terapeutických onkologických vakcín a léků, léčby nádorů, terapie nahrazováním proteinů, regenerační medicíny a buněčné a genové terapie (CGT).
mRNA vakcína | terapeutika mRNA |
|
Proces | Volitelná služba | Detaily služby | Doba dodání (pracovní den) | Dodané výsledky |
návrh a optimalizace sekvenčního řetězu mRNA | Návrh a optimalizace kodujících sekvencí | Návrh sekvence CDS a optimalizace kodonů | 1-3 | Soubor sekvence |
Návrh a optimalizace nekódovacích sekvencí | Návrh a optimalizace UTR, polyA sekvencí | |||
Příprava transkripčního šablonového plazmidu | Příprava rekombinantních plazmidů | Syntéza genu | 7-10 | |
Amplifikace a extrakce plazmidu | 4 | |||
Linearizace a čištění plazmidu | ||||
in Vitro transkripcemiRNA | Kovalentní zakončení (jednoetapová metoda) | In vitro transkripce (IVT) / Kap analog | 1-2 | N/A |
Modifikace nucleotidů (modifikace UTP/CTP) | ||||
Odstranění DNA šablony (DNase I) | ||||
Enzymatické zakončení (dvoukrokový proces) | IVT | 2-3 | ||
Modifikace nucleotidů (modifikace UTP/CTP) | ||||
Odstranění DNA šablony (DNase I) | ||||
čištění mRNA (chlorid litný/magnetické částice) | ||||
Enzymatické zakončení | ||||
čištění mRNA | Konvenční schéma čištění | Konzolidace chloridem litným | 1 | látka mRNA pro lék |
Čištění magnetickými částicemi | ||||
Schéma čištění sloupcovou chromatografií | Kombinace více chromatografických metod | 1-2 | ||
Výměna.bufferu | Ultrafiltrace | 1 | ||
lyofilizace mRNA | Lyofilizace | Předzamražení | 2-3 | lyofilizovaný prášek mRNA |
První fáze sušení (sublimace) | ||||
Druhá fáze sušení (desorpce) | ||||
encapsulace mRNA | Encapsulation do LNP | Encapsulation do LNP | 2-3 | mRNA-LNP léčivý přípravek |
Koncentrace a výměna.bufferu | ||||
analýza kvality mRNA | léčivá mRNA/ljofilizovaný prášek | Koncentrace, čistota | 1 | Zkušební zpráva |
Integrita, efektivita zakončení, distribuce polyA ocasů | 2-5 | |||
léčivý produkt mRNA-LNP | Účinnost encapsulace | 1 | ||
Velikost částic a jejich rozdělení | ||||
Povrchový náboj | ||||
ověření expresnosti mRNA | posouzení buněk 293T | Přísobení buněk | 4 | |
Dočasné transformace buněk | ||||
Observace fluorescenčního signálu | 1-3 | |||
Western blot (WB) / Imunoenzymová asociační metoda (ELISA) |
5' Kap |
▪ Nekapovaný ▪ Cap0, společně kapovaný ▪ Cap1, společně kapovaný ▪ Cap1, enzymatické zakapování |
5' UTR/3' UTR |
▪ Přirozená UTR sekvenční ▪ Mutantní/Stavěná UTR sekvenční |
3' PolyA ocas |
▪ 100A ~120A ocas (doporučeno) ▪ Dělený polyA ocas ▪ Jiné vlastní ocasy |
Modifikované nukleosidy |
▪ Nezmodifikované základy ▪ Pseudouracil (Ψ) ▪ N1-Methylpseudouridin (N1Ψ) ▪ 5-methylcytosin (m5C) ▪ 5-methyluridin (m5U) ▪ 5-methoxyuridin (5moU) ▪ 2-thiouridin (s2U) ▪ 2′-O-methyl-U ▪ Jiné úpravy |
Integrovaný pracovní postup
Poskytuje řadu služeb od návrhu sekvence na začátku až po přípravu mRNA, kontrolu kvality a ověření výrazu na konci.
Mezinárodně inovativní návrh a optimalizace sekvencí
Profesionální návrh a optimalizace mRNA posloupnosti usnadňují efektivní expresi mRNA.
Rozmanité úpravy nukleotidů
Účinně zvyšují expresi mRNA a snižují nevhodné imunitní reakce na mRNA.
Dospělá čistící platforma
S kombinací konvenčního a vlastně navrženého metody čištění jsou získány vzorky mRNA s vysokou čistotou.
Kompletní platforma pro kvalitní kontrolu
Bohatší možnosti kvalitní kontroly pro splnění požadavků běžných testů, jako je koncentrace, čistota A260/280 a integrity, stejně jako požadavky na vysokou kontrolu kvality, jako je účinnost zakončení/polyA distribuce.
Rychlé dodání
Na míru navržená mRNA může být dodána již za 7 dní, s výjimkou externalizované syntézy sekvence.