Příprava CircRNA vyžaduje lineární RNA jako prekurzorový materiál (prekurzor RNA) pro cyklizaci, kde se prekurzor RNA obvykle připravuje pomocí linearizované plazmidové DNA jako transkripčního templátu a transkribuje se in vitro pomocí T7 RNA polymerázy.
Vysoce kvalitní plazmidová DNA je nezbytná pro in vitro transkripci (IVT). Na základě servisní platformy pro přípravu zralého plazmidu může Yaohai Bio-Pharma poskytnout službu přípravy vysoce čisté a standardní linearizované plazmidové DNA (pDNA), aby byla zajištěna integrita produktů IVT.

Podrobnosti o službách
Proces |
Volitelná služba |
Podrobnosti služby |
Dodací lhůta (pracovní den) |
Příprava cirkulárního plazmidu |
Genová syntéza |
Genová syntéza (třetí strana) |
7-10 |
Amplifikace plazmidu |
Amplifikace plazmidu |
2 |
Extrakce plazmidu |
Příprava linearizovaného plazmidu |
Linearizace a čištění plazmidu |
Linearizace plazmidu |
1 |
Linearizace Purifikace DNA |
Kontrola kvality plazmidové DNA |
Koncentrační čistota |
Ultrafialová (UV) spektrofotometrie |
1-2 |
Plazmidová konformace |
Elektroforéza na agarózovém gelu (AGE) |
Kapilární elektroforéza (CE) – volitelná |
Identifikace plazmidu |
Identifikace restrikčního enzymu/ AGE |
Naše funkce
- Volně střižená šablona Plazmid
Flexibilní výběr metod linearizace
Optimalizace metod extrakce a purifikace DNA pro dosažení vysoké míry výtěžnosti.
Přísné standardy řízení procesu s mírou superhelikální konformace vzorků plazmidu pro výzkum přes 80 %.
Vysoce standardní a vysoce účinná příprava plazmidu a služby kontroly kvality pro splnění experimentálních potřeb.
Případová studie
Vezmeme-li jako příklad produkt Yaohai Bio-Pharma mCherry circRNA, poměr superspirálů u vzorků plazmidu transkripčního templátu (výzkumný stupeň) je více než 70 %, s mírou linearizace blízkou 100 %.
mCherry circRNA se připraví s linearizovaným plazmidem jako templátem a transfekuje se do 293T buněk. Vysoká hladina fluorescenční exprese (červená fluorescence) je detekována po 24 hodinách transfekce, která bude zesílena po 48 hodinách a může být stále detekována 7. den a 14. den po transfekci.
Protein mCherry je stabilně a účinně exprimován a čistota transkripčního templátu může splnit požadavek na léčivý produkt circRNA (DP) s vysokou kvalitou.

In vitro ověření exprese mCherry circRNA