Ve srovnání s dvoukrokovým enzymatickým cappingem může jednokroková ko-transkripční metoda capping významně snížit tok procesu. Metoda je orientována na výsledek a zahrnuje přidání cap analogů do in vitro transkripční (IVT) reakce. Cap analoga mohou být zavedena na začátku transkripce a mRNA se strukturou cap může být získána po dokončení transkripce. Současné analogy s čepičkou třetí generace se mohou vyhnout reverzní čepičce a přímo přidat strukturu čepičky 1 k transkripčnímu produktu.
Pokud jde o imunogenicitu mRNA in vivo a účinnost translace, proces IVT často přijímá určité druhy modifikovaných NTP a běžné modifikované nukleotidy jsou pseudouridin (Ψ), N1-methyl-pseudouri-din (N1Ψ) a 5-methylcytosin (5mC) .
Obrázek: Schéma mRNA ko-transkripční a cappingové reakce
Podrobnosti služby
Servis |
Podrobnosti služby |
Dodací lhůta (pracovní den) |
Ko-transkripční omezení |
Transkripční odpověď in vitro (analog Clean Cap) |
1-2 |
| Nukleotidové modifikace (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Odstranění templátu DNA (DNáza I) |
Optimalizace podmínek IVT - volitelná |
Návrh a optimalizace reakčních komponent |
3-7 |
Naše funkce
- Diverzifikované strategie modifikace nukleotidů
Více volitelných strategií modifikace nukleotidů může zlepšit expresi proteinu.
- Optimalizovaný reakční systém
Dosáhněte vysokého transkripčního poměru a vysoké účinnosti zakrytí.
- Stabilní proces uzavírání
Dosáhněte míry omezení vyšší než 95 %.
Účinně zabraňte degradaci mRNA přísnou kontrolou RNázy v experimentálním prostředí a spotřebním materiálu.
Případová studie
Společnost Yaohai Bio-Pharma vybudovala vyspělou platformu pro proces kotranskripčního cappingu s použitím čistých analogů cap k přímému přidání struktury Cap1, přičemž se vyhýbá zpětnému cappingu. Po standardizované předúpravě vzorku a detekci kapilární elektroforézou (CE) může míra překrytí mRNA se zesíleným zeleným fluorescenčním proteinem (eGFP) dosáhnout více než 95 %.
Účinnost zakrývání mRNA eGFP více než 95 %
eGFP mRNA a mCherry mRNA připravené ko-transkripční čepičkou jsou transfekovány do buněk 293T, v tomto pořadí, a po 48 hodinách je pozorován silný fluorescenční signál, což naznačuje, že mRNA je účinně exprimována v buňkách 293T.
Exprese eGFP mRNA a mCherry mRNA v buňce 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
