Vývoj navazujících procesů

Mikrobiální CDMO

Význam vývoje navazujících procesů (DSP).

Celý fermentační bujón obsahuje cílový protein nebo plazmid, stejně jako nečistoty související s produktem a procesem, např. agregáty, substráty mikrobiálních buněk, proteiny hostitelské buňky (HCP), DNA hostitelské buňky (HCD), endotoxin a antibiotika.

Proto je klíčové navrhnout účinný DSP, purifikační proces, k odstranění určitých nečistot a produkci vysoce purifikované a vysoce kvalitní léčivé látky. Kromě toho může optimalizace procesu čištění pomoci zvýšit výtěžnost produktu, snížit náklady a zlepšit škálovatelnost a reprodukovatelnost procesu.

Klíčová slova: vývoj procesu, optimalizace a validace, proces čištění, chromatografie, eliminace nečistot, odstranění HCP, eliminace HCD, odstranění endotoxinu, denaturace a refolding proteinu, sestavení VLP, konjugace

Použití: Biofarmaceutický průmysl, humánní medicína, medicína zvířat, vakcína, rekombinantní biologika s velkou molekulou, rekombinantní biologika, biologické činidlo

DSP řešení Yaohai Bio-Pharma

Máme rozsáhlé zkušenosti s izolací cílových proteinů nebo plazmidů z komplexních matric vývojem a optimalizací následného purifikačního procesu. Existují různé typy jednotkových operací vhodných pro čištění biologických látek, včetně centrifugace, filtrace, homogenizace, alkalické lýzy, ultrafiltrace, srážení, denaturace a opětovného skládání proteinů, chromatografie atd.

Mezi naše dostupné služby vývoje čištění patří:

Vývoj celého purifikačního procesu od odběru buněk nebo supernatantu až po finální účinnou látku.
Optimalizace procesu čištění na základě nečistot souvisejících s produktem a procesem pro zvýšení kvality a bezpečnosti produktu, např. HCP, HCD, endotoxin.
Definice a optimalizace klíčových parametrů v jedné nebo několika jednotkových operacích, včetně buněčné lýzy, filtrace s tangenciálním tokem, screeningu pryskyřice, chromatografie, denaturace proteinů a refoldingu atd.
Optimalizace procesu z hlediska kvality, výnosu, obnovy, nákladů a škálovatelnosti.
Validace následného procesu čištění.
Hodnocení rozsahu parametrů na základě rizika a návrh experimentů (DoE) v modelování procesů.

Podrobnosti služby

Standardizované platformy pro purifikaci proteinů nebo plasmidů jsou založeny na několika krocích surového čištění a méně než 4 krocích chromatografie, včetně zachycení, přechodného čištění a leštění.

Podrobnosti služby	Operace jednotky	parametry
Surové čištění	Odstředění	Rychlost otáčení, čas
	Vysokotlaká homogenizace	Celkový obsah pevných látek, tlak, cykly
	Kontinuální alkalická lýza	Poměr resuspendovaných buněk k lyzačnímu roztoku, doba lýzy
	Filtrace tangenciálního toku	Materiál membrány a velikost pórů, průtoková rychlost transmembránového tlaku (TMP), poměr objemu filtrátu k ploše membrány
	Srážky	Typ a koncentrace srážedla, přísada, pH, teplota, čas
Denaturace a skládání	Solubilizace proteinů inkluzních tělísek	Koncentrace denaturačního činidla (např. močovina, guanidin HCl, silný iontový detergent), detergenty (např. dodecylsulfát sodný, SDS), redukční činidla (např. dithiothreitol, DTT), chelatační činidla (kyselina ethylendiamintetraoctová, EDTA), teplota, čas
Denaturace a skládání	Refolding proteinů	Metody refoldingu (ředění, dialýza nebo SEC refolding), koncentrace bílkovin, pufry, pH, teplota, čas, oxidační a redukční činidla (např. glutathion, GSH/oxidovaný glutathion, GSSH, DTT/GSSH, cystein/cystin), aditiva malých molekul (L-arginin, močovina, guanidin/HCl a detergenty)
Zachycení, přechodné čištění a leštění	AC (afinitní chromatografie)	Několik typů chromatografické pryskyřice/kolony (např. AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), délka a průměr kolony, složení pufru, vstřikovaný objem, složení mobilní fáze (adsorpce a desorpce), pH, průtok, vazba, Podmínky praní a eluce.
	IEX (Aniontová nebo katexová chromatografie)
	HIC (hydrofobní interakční chromatografie)
	Odsolování a/nebo vylučovací chromatografie (SEC)
	RPC (chromatografie s reverzní fází)
	MMC, smíšená chromatografie

Případová studie

případ 1

Jsme pověřeni vývojem a optimalizací následného purifikačního procesu pro zvýšení čistoty proteinu z 85 % na 90 % při současném snížení chromatografických kroků.

Yaohai dodal robustní a škálovatelný proces čištění se 3 kroky chromatografie pro cílový protein, bakteriální alergii. A výsledná čistota dosáhla 95 %.

případ 2

Společnost Yaohai byla naším klientem jmenována, aby optimalizovala proces odstraňování endotoxinů u vakcíny s částicemi podobnými viru (VLP).

Náš tým provedl optimalizaci parametrů chromatografie a připravil léčivou látku s čistotou 98 % a zbytkem endotoxinu 12.8 EU/mg.

Naše zkušenosti

Podíleli jsme se na vývoji a výrobě různých velkých molekul, včetně rekombinantních podjednotkových vakcín, VLP, hormonů (inzulín, GLP-1, růstový hormon), cytokinů (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21 ), růstové faktory (EGF, FGF, NGF), nanoprotilátky/jednodoménové protilátky (sdAb), enzymy atd.

Zařízení

Používáme špičkové systémy AKTA Pure, AKTA Avant a preparativní HPLC pro provádění různých chromatografických metod včetně afinity, iontové výměny, hydrofobní interakce, reverzní fáze a vylučovací chromatografie.

Všechny kategorie

Vývoj navazujících procesů

Mikrobiální CDMO