Profilování N-glykanů je nezbytné pro výrobu biofarmaceutik. Yaohai Bio-Pharma poskytuje službu profilování N-glykanů pomocí kapalinové chromatografie-hmotnostní spektrometrie (LC-MS) uvolněných a značených glykanů. Obecné kroky pro přípravu vzorku N-glykanů zahrnují štěpení glykoproteinu (GP), deglykosylaci, purifikaci, značení/derivatizaci a extrakci na pevné fázi (SPE).
Podíleli jsme se na proteinové strukturní charakterizaci různých velkých molekul, včetně rekombinantních podjednotkových vakcín, nanoprotilátek/VHH/jednodoménových protilátek (sdAbs), fragmentů protilátek, hormonů/peptidů, cytokinů, růstových faktorů (GF), enzymů, kolagenů, atd.
Regulační požadavky na profilování N-glykanů
Podle směrnice ICH Q6B se „u glykoproteinů stanovuje obsah sacharidů (neutrální cukry, aminocukry a kyseliny sialové). Kromě toho se v možném rozsahu analyzuje struktura sacharidových řetězců, oligosacharidový vzor (antenární profil) a glykosylační místo (místa) polypeptidového řetězce.
Analytická metoda
| Analýza |
Metody |
| N-glykanové profilování |
Analýza uvolněných a značených glykanů kapalinovou chromatografií a hmotnostní spektrometrií (LC-MS) |
postupy
1. Enzymatické uvolňování glykanu pomocí peptidu N-glykosidázy F (PNGáza F)
2. Derivatizace uvolněných glykanů 2-aminobenzamidem (2-AB)
3. Čištění sklizených N-glykanů na koloně TSK Amide - 80, pokud jsou přítomna velká množství detergentů, netěkavých solí nebo materiálů s volnými aminoskupinami
4. Značení fluorescenčním 2-aminobenzamidem (2-AB)
5. LC-MS analýza značených N-glykanů
6. Analýza dat
CS
EN
AR
HR
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
