Profilování N-glykanů je nezbytné pro výrobu bioléčiv. Yaohai Bio-Pharma nabízí službu profilování N-glykanů pomocí kapalné chromatografie - hmotnostní spektrometrie (LC-MS) uvolněných a označených glykanů. Obecné kroky při přípravě vzorku N-glykanů zahrnují hydrolyzu glykoproteinu (GP), odglykosylaci, čištění, označování/derivaci a extrakci na pevné fázi (SPE).
Angažujeme se v charakterizaci struktury bílkovin různých velkých molekul, včetně rekombinantních podjednotkových vakcín, nanotěles/VHHs/jednodoménových antitěl (sdAbs), fragmentů antitěl, hormonů/peptidů, cytokinů, růstových faktorů (GF), enzymů, kolagenů atd.
Regulační požadavky pro profilování N-glykanů
Podle směrnice ICH Q6B, „pro glykoproteiny je určen obsah sacharidů (neutrálních cukrů, aminocukrů a sialových kyselin). Navíc jsou analyzovány struktury sacharidových řetězců, vzor oligosacharidů (antennářský profil) a místa glykosylace polypeptidového řetězce v rozsahu možností.
Analytická metoda
| Analýza |
Metody |
| Profilování N-glykanů |
Analýza volných a označených glykanů pomocí kapalné chromatografie - massové spektrometrie (LC-MS) |
Procedury
1. Enzymatické uvolnění glykanů peptidovou N-glykosidázou F (PNGase F)
2. Derivací uvolněných glykanů 2-aminobenzamidem (2-AB)
3. Očištění sběraných N-glykanů na sloupci TSK Amide - 80, pokud jsou přítomny velké množství detergencí, nevola tilních solí nebo látek s volnými aminokapradými skupinami
4. Označení fluorescujícím 2-aminobenzamidem (2-AB)
5. LC-MS analýza označených N-glykanů
6. Analýza údajů
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
