Obsazení N-glykosylačního místa je fyziologickou vlastností glykoproteinů a převážně produkují N-glykan. Analýza obsazení N-glykosylačních míst od společnosti Yaohai Bio-Pharma se provádí pomocí trávení, uvolňování, bohatění a analýzy pomocí techniky kapalné chromatografie-elektrospray ionizace massové spektrometrie-massová spektrometrie (LC-ESI-MS/MS).
Angažujeme se v charakterizaci struktury bílkovin různých velkých molekul, včetně rekombinantních podjednotkových vakcín, nanotěles/VHHs/jednodoménových antitěl (sdAbs), fragmentů antitěl, hormonů/peptidů, cytokinů, růstových faktorů (GF), enzymů, kolagenů atd.
Regulační požadavky pro obsazení N-glykosylačního místa
Podle směrnice ICH Q6B „pro glykoproteiny je určeno sacharidové obsah (neutrální cukry, aminocukry a sialové kyseliny). Navíc jsou analyzovány struktury sacharidových řetězců, oligosacharidový vzor (antenná profil) a místa glykosylace polypeptidového řetězce ve všech možných rozsazích.“
Analytická metoda
| Analýza |
Metody |
| Okupance místa N-glykosylace |
LC-MS po deglykosylační a proteolytické digesti |
Procedury
1. Proteinní digestace proteinů pro vytvoření malých peptidových fragmentů.
2. Uvolnění N-glykanů pomocí endoglykosidázu H nebo PNGase F. Endoglykosidáza H přeruší vazbu mezi dvěma GlcNAc rezidui v jádru N-spojených glykanů, zatímco PNGase F je glykoamidáza, která přeruší vazbu mezi GlcNAc a Asn, uvolňuje celý cukernatý řetězec a přemění Asn na Asp se zvýšenou hmotností o 1-Da.
3. Obohacení N-glycopeptidů pomocí HILIC (Hydrofilní Interakční Kapalná Chromatografie)
4. Analýza okupovanosti N-spojených glykosylačních míst pomocí LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
