Všechny kategorie
Minikruh DNA

Minikruh DNA

Domů >  Metoda  >  Nukleové kyseliny  >  Minikruh DNA

Metoda

Minikruh DNA

Minicircle DNA (mcDNA) je menší nevirový DNA vektor odvozený z rodičovské plasmidové DNA podobné struktury. Minikruhová DNA se liší od konvenční plazmidové DNA tím, že obsahuje promotor a požadovaný gen (GOI), bez počátku replikace (ORI) a selekčního markeru (selMark). Minikruhová DNA je produkována v bakteriích prostřednictvím in vivo rekombinace k odstranění dalších sekvencí (nazývaných mini-plazmid) z plazmidové DNA. Díky své bezpečnosti si minikruhová DNA získala oblibu jako nevirový vektor pro genovou terapii, DNA vakcíny atd.

图片

Obrázek 1. Struktura plazmidové DNA (pDNA) a minikruhové DNA (mcDNA)

Minikruhové systémy rekombinace DNA

Existují čtyři hlavní minikruhové DNA rekombinační systémy in vivo, které byly studovány, včetně Phage λ integrázy, Phage P1 Cre rekombinázy, ParA resolvázy, PhiC31 integra se/I-Scel.

Strategie

Integráza fága λ

Rekombináza fágu P1 Cre

ParA resolvase

PhiC31 integra se/I-SceI

Mechanismus

Tyrosinová rekombináza, která funguje prostřednictvím proteinů FIS a IHF, aby katalyzovala rekombinaci hybridních míst att

Místně specifická tyrosinová rekombináza, která při vazbě na místa loxP provádí obousměrnou rekombinaci

Serinová rekombináza, která provádí ireverzibilní a jednosměrnou rekombinaci mezi dvěma identickými místy MRS

Serinová rekombináza, která zprostředkovává jednosměrnou rekombinaci mezi vazebnými místy attP/attB, zatímco endonukleáza I-Scel štěpí nečistoty související s produktem a nekombinovaný rodičovský plazmid

Funkce

Závisí na expresi hostitelských faktorů FIS a IHF; vnitřní toxicita; Zbytkový rodičovský plazmid a miniplazmid

Zbytkový rodičovský plazmid a miniplazmid

Vysoký výnos; Zbytkový rodičovský plazmid a miniplazmid

Degradace rodičovského plazmidu spojená s nižším výtěžkem

Yaohai Bio-Pharma nabízí jednorázové CDMO řešení pro Minicircle DNA
Reference:

[1] Almeida AM, Queiroz JA, Sousa F, Sousa Â. Minikruhová DNA: Budoucnost vektorů založených na DNA? Trends Biotechnol. říjen 2020;38(10):1047-1051. doi: 10.1016/j.tibtech.2020.04.008.

Získejte zdarma nabídku

Ozvěte se nám