Enzymatický reagens

Enzymatický reagens

Modalita

Proteazy pro odstranění tagu

Pro zvýšení rozpustnosti a zjednodušení procesu čištění rekombinantních bílkovin vědci obvykle přidávají fúzní tagy, z nichž His-tag, maltózové vázané bílko (MBP) a glutathion-S-transferáza (GST) jsou běžně používané.

I když je tag přidaný jako dodatečná sekvence bílkoviny, měl by být odebrán, aby se udržela biologická aktivita v farmaceutickém průmyslu. Odstranění fúzních tagů vyžaduje proteázy s lokálním působením, jako jsou enterokináza (EK), trombin, proteáza tabákového rozličného viru (TEVp), lidská rhinoviróza 3C (HRV3C), malá ubiquitinová modifikující bílkovina (SUMO) proteáza, tabákový žilnatý mazlavý virus (TVMV) proteáza a karboxypeptidáza A/B (CPA/CPB).

Typ	Enzym	Poznávací místo
Endoproteázy pro odstranění tagu	Enterokináza (EK), enteropeptidáza	DDDDK↓
	Thrombin	LVPR↓GS
	TEV proteáza	ENLYFQ↓G
	HRV3C proteáza	LEVLFQ↓GP
	SUMO proteáza	Terciární struktura SUMO
	TVMV proteáza	ETVRFQG↓S
Exoproteázy pro odstranění tagu	Karboxypeptidáza A (CPA)	C-terminální aminokyseliny, s výjimkou Pro, Lys a Arg
Exoproteázy pro odstranění tagu	Karboxypeptidáza B (CPB)	C-terminální Lys a Arg

Ostatní proteázy

Aplikace	Enzym	Funkce
Ostatní proteázy	Proteáza K	Serinová proteáza, která tráví bílkoviny hydrolyzí po peptidových vazbách.
	IdeS, IgG proteáza	Enzymy degradující IgG (Ides), které štěpí na konkrétním místě imunoglobulinu G (IgG), vytvářející Fab a Fc fragmenty
	IgA1 proteáza	Proteolytický enzym, který štěpe konkrétní místo v sekvenci spojovací oblasti lidské imunoglobuliny A1 (IgA1).

Nukleáza

Aplikace	Enzym	Funkce
Nukleáza	Nukleáza	Štěpí nukleové kyseliny (DNA nebo RNA) hydrolyzí fosfodiesterových vazeb.
Nukleáza	Restrikční enzym	Endonukleáza, která štěpí DNA na nebo poblíž konkrétních míst.

Amidáza

Aplikace	Enzym	Funkce
Amidáza	PNGase F	Štěpe mezi nejvnitřnějším GlcNAc a rezidui asparaginu v oligosacharidech s vysokým manosem, hybridními a komplexními.

Všechny kategorie

Enzymatický reagens

Modalita