Fő enzymek hosszú RNA gyártásához
az mRNA, mint típusú hosszú kódoló RNA, biztonságosan és hatékonyan teljesített egy szélesebb emberi csoportban a COVID-19 idején. Más hosszú kódoló RNA-k, például az önfejtő RNA (saRNA) és a körös mRNA (circRNA) szintén mutattak hatékonyságot a preklinikai és klinikai tanulmányok során.
A hosszú kódoló RNA nagy mérlegű gyártása in vitro transkripcióra (IVT) támaszkodik több enzimatikus reakció segítségével. Az RNA gyártás lépéseit tartalmazzák: sablon DNA előkészítése, IVT RNA szintézis, cirkuláció, DNA eltávolítása, RNA módosítás (fedés és farok), valamint RNA tisztítása.
Több kulcsfontosságú enzimet használnak a hosszú kódoló RNA gyártásában (pl. mRNA, saRNA és circRNA), beleértve a korlátozó endonukleázát, a T7 RNA polymerázist (T7 RNAP), az RNáz inhibitorát, az inorganikus pirifoszfátázát, a DNáz I-t, a vaccinia fedő enzimet és az RNáz R-t.
A folyamat
|
Enzim
|
Függvény
|
Sablon DNA előkészítése
|
Korlátot tűznek a restrikció-endonukleázok
|
A plazmid DNS (pDNS) lineárisítása a hosszabb transkript generálásának elkerülése érdekében.
|
IVT RNA szintézis
|
T7 RNA polymeráz (T7 RNAP)
|
Kötődnek a T7 promotorhoz és specifikus RNA-transkriptot alkotnak; Játsszanak kulcsfontosságú szerepet az IVT reakció során.
|
RNáz inhibitor, rekombinált
|
Inhibálnak az RNáz tevékenységét az IVT-reakció során.
|
Pirofoszfatasz, inorganikus (iPPase)
|
Előzék meg a pirofoszfát képzését az IVT-reakció során.
|
DNS eltávolítása
|
DNáz I
|
Eltávolítsa a DNA-sablonot.
|
RNA módosítás
|
Vaccínia fedélzeti enzim
|
Adjuk hozzá a Cap1 szerkezeteket az IVT mRNA 5′-végéhez.
|
2’-O-Metyltransferáz
|
circRNA bővítés |
Rnáz R |
Lineáris RNA megsemmisítése és körkörű RNA gazdagítása. |
A Yaohai Bio-Pharma egyetlen ablakból kínál CDMO megoldást enzimek számára