A felsőfolyamat-fejlesztés jelentősége
A felsőfolyamat (USP), más néven fermentációs folyamat, az egyik kezdeti szakasz a felsőfolyami bioproceszek során. A mikrobiológiai fermentációs folyamat kulcsfontosságú a magas sűrűségű sejttermeléshez és a külső génkifejezéshez, amely közvetlenül befolyásolja a biológikumok termelési arányát és költségét.
A biológikumok fejlesztésének korai szakaszain (előklinikai vagy 1./2. fázis) a hangsúly arra helyezkedik, hogy skálázható állatmentes folyamatokat fejlesszenek ki közepes termelési arányokkal, amelyek megfelelnek minden termékminőségi szabványnak.
A későbbi fejlesztési szakaszokban (3. fázis vagy kereskedelmi), a teljesítmény, rugalmasság, skálázhatóság és reproduktibilitás lesz a fókusza, amivel egy költségekkel hatékonyabb folyamatot teremtünk. Ezekkel a kérdésekkel foglalkozó tevékenységek a folyamat jellemzése és a folyamat ellenőrzése. Ezen időszakban általánosan alkalmazzák a tervezett minőség (QbD) és a kísérlettervezés (DoE) eszközeit.
Kulcsszavak: folyamatfejlesztés, optimalizálás és ellenőrzés, fermentációs folyamat, mikrobiológiai sejta fermentáció, baktérium fermentáció, gyümölcszőldszer fermentáció, magas-sűrűségű fermentáció, módosított távolságú fermentáció
Alkalmazás: biogyermedési ipar, emberi orvosság, állati orvosság, vakcina, rekombinált nagy molekula-biológikumok, rekombinált biológikumok, biológiai reagens
Yaohai Bio-Pharma USP Megoldásai
Több mint tíz éves mikrobiológiai fermentációs tapasztalatból élve, a Yaohai Bio-Pharma képes segíteni a fermentációs folyamatok problémáinak megoldásában. Gyorsan kidolgozhatunk magas-sűrűségű fermentációs stratégiákat Escherichia coli (E. coli) periplasztikus szekrézés, intraceluláris oldható vagy inklúziós test kifejezés, valamint Gyümölcsextracelluláris vagy intraceluláris kifejezés.
A rendelkezésre álló általános fermentációs fejlesztési szolgáltatásaink közé tartozik:
- Fermentációs folyamat tervezése 7L-es kis méretben fedettszelgési módban
- Három tételű folyamat-érvényesítés 7L-es fermenterekben
- Középső folyamat-feszítmény 30L/70L-re
Több paramétert optimalizálhatunk rugalmasan az elvárt termékesség vagy arány érdekében, One-Time-A-Factor (OTAF) vagy Design-of-experiments (DoE) módszert használva.
Az alapvető fermentációs paraméterek a következők:
Állati anyagok nélküli fermentációs médium összetétele
Antibiotikumok nélkül vagy nem, Kezdőkultúra térfogata
Növekedési hőmérséklet, pH, Oldott oxigén (DO) szint
Ellátási mód (pl., fed-batch)
Induktor koncentráció (pl., IPTG, metanol), Indukciós pont (sejt feszítható tömeg/OD600),
Indukciós hőmérséklet, Indukciós idő
stb.
Szolgáltatás részletei
| Szolgáltatások |
Folyamatmenet |
| Termesztés Rándítóflaskaban (500 mL) |
Állatmentes kultivációs anyagok előkészítése → Mikrobiológiai kezdőszer termesztése → Termesztés rándítóban → Indukció → Gyűjtés |
| Termesztés Fermenterben (7 L) |
Állatmentes kultivációs anyagok előkészítése → Mikrobiológiai kezdőszer termesztése → 7L bioreaktorban történő magas-sűrűségű sejt fermentáció → Indukció → Gyűjtés |
| Fehérjék/Péptidök minőségbiztosítása |
Előkészítés Belügyi oldott kifejezés: Mikrobiológiai sejtek gyűjtése és újra feloldása → Ultrahangos törintés → Sejtszamarak eltávolítása → Többszörös kivonat Beleágyazott test kifejezés: Mikrobiológiai sejtek gyűjtése és újra feloldása → Ultrahangos törintés → Beleágyazott test előkészítése → Többszörös kivonat Külső oldott kifejezés: Kultúrális szupernánk gyűjtése → Koncentráció és búfercseré → Többszörös kivonat Minőség elemzés Többszörös kivonat mintaként → Cél proteina elemzése SDS PAGE vagy Western blot (WB) módszerrel |
| Plazmidok minőségi ellenőrzése |
Előkészítés és minőség elemzés Plazmid kivonat → DNA elemzés agároz gel elektroforézissel |
Esettanulmány
A vevő által bocsátott rendelésben a cél polipeptid hormon teljesítményét növeljük 8 g/L-ről 10 g/L-re.
A Full Factorial Design és a Response Surface Design alkalmazásával a DoE eszközökben gyorsan megismerhetők és optimalizálhatók a kulcsfontosságú fermentációs paraméterek. Az optimalizált, magas sejtsűrűségű fermentációs folyamat alatt a kifejezési szint 10 g/L-re növekedett.
Tapasztalataink
- Különféle mikrobiológiai házigazdákkal dolgoztunk, például: E. Coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; Pichia pastoris (P. pastoris) SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink strain1/2/3/4; Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) és Hansenula polymorpha (H. polymorpha) .
- Széles körű tapasztalattal rendelkezünk E. coli periplaszma szekrényezés, oldható és inkluziós test kifejezés, valamint Gyümölcsintraceluláris vagy extraceluláris szekrényezés. Az inkluziós test mennyisége maximum 10 g/L lehet, míg az oldható fehérjék termelése 0,5 és 15 g/L között változik.
- Részt vettünk különböző nagy molekula fejlesztésében és gyártásában, beleértve a rekombinánszubunit-vaccinákat, vírusféle részecskéket (VLP-k), hormonokat (inszulin, GLP-1, növekedési hormon), citokinokat (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), növekedési tényezőket (EGF, FGF, NGF), nan testeket/egyedoma-szántékokat (sdAbs), enzimeket, stb.
- Berendezések
7L*16 Fermentációs Rendszer
Cedex Bio Analizátor, Bioprocesso analizátor
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
