Az N-glikánok profilalkotása elengedhetetlen a biogyógyszerek előállításához. A Yaohai Bio-Pharma N-glikán profilalkotási szolgáltatást nyújt a felszabaduló és jelölt glikánok folyadékkromatográfiás tömegspektrometriájával (LC-MS). Az N-glikánminta előállításának általános lépései közé tartozik a glikoprotein (GP) emésztése, a glikozilezés, a tisztítás, a jelölés/származékképzés és a szilárd fázisú extrakció (SPE).
Részt vettünk különböző nagy molekulák fehérjeszerkezeti jellemzésében, beleértve a rekombináns alegység vakcinákat, nanotesteket/VHH-kat/ egydoménes antitesteket (sdAb-okat), ellenanyag-fragmenseket, hormonokat/peptideket, citokineket, növekedési faktorokat (GF), enzimeket, stb.
Az N-glikán profilalkotásra vonatkozó szabályozási követelmények
Az ICH Q6B irányelv szerint „glikoproteinek esetében a szénhidráttartalmat (semleges cukrok, aminocukrok és sziálsavak) határozzák meg. Ezenkívül lehetőség szerint elemzik a szénhidrátláncok szerkezetét, az oligoszacharid mintázatot (antennáris profil) és a polipeptidlánc glikozilációs helye(i)t.
Analitikai módszer
| Elemzés |
Mód |
| N-glikán profilalkotás |
A felszabaduló és jelölt glikánok folyadékkromatográfiás-tömegspektrometriás (LC-MS) elemzése |
Eljárások
1. Enzimatikus glikán felszabadulás peptid N-glikozidáz F-vel (PNGáz F)
2. A felszabaduló glikánok származékképzése 2-aminobenzamiddal (2-AB)
3. Az összegyűjtött N-glikánok tisztítása TSK Amid - 80 oszlopon, ha nagy mennyiségű detergens, nem illékony sók vagy szabad aminocsoportokat tartalmazó anyagok vannak jelen
4. Jelzés fluoreszcens 2-aminobenzamiddal (2-AB)
5. Jelzett N-glikánok LC-MS analízise
6. Adatelemzés
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEM
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
