A körkörös mRNA (circRNA) széleskörűen használatos a gén vagy fehérje funkcióinak tanulmányozásában. Ugyanakkor népszerű a profilaxisra és terápiai célokra szolgáló biológiás termékek fejlesztésében, hasonlóan az mRNA-hoz.
A Yaohai Bio-Pharma kidolgozott egy sor circRNA szintézis technológiát, hogy magas minőségű RNA-t biztosítson, például sorrendtervezés és optimalizálás, in vitro transkripció (IVT), körbefogás/körözés, tisztítás és lipidnanoparticula (LNP) burkolás. Az összes termék szigorú minőségbiztosítási (QC) szabványok alapján engedélyezett.
A lineáris mRNA-hoz képest a köriformú RNA (circRNA) szerkezetileg stabilebb, és jelenleg a nukleinsav-gyógyszer kutatás fő hideg pontja. Széles körű alkalmazási területe van különféle területeken, függetlenül attól, hogy kodoló circRNA vagy nem-kodoló circRNA van szóban, beleértve az fertőzési betegségek elleni prevenciós oltásokat, a rákterápiai oltásokat, a rákterápiai gyógyszereket, a proteint cserélő terápiát, a regeneratív orvostudományt, a sejt- és génterápiát (CGT), a molekuláris szivárvány szerepét és az RNA aptamert.
A folyamat | Opcionális Szolgáltatás | Szolgáltatás részletei | Szállítási idő (Nap) |
circRNA-sorozat tervezése és optimalizálása | Kódoló sorozatok tervezése és optimalizálása | CDS kódot optimalizálása | 1 |
Nem kódoló szekvensek tervezése és optimalizálása | Intron és exont sorozat, homológus kar és távolság tervezése és optimalizálása | 1-2 | |
Körképző plazmid előkészítése | Gén szintézis | Gén szintézis (Harmadik féltől) | 7-10 |
Plazmid amplifikáció | Plazmid amplifikáció | 2 | |
Plazmid kivonás | |||
Lineáris plazmid előkészítése | Plazmid lineárisítása és tisztítása | Plazmid lineárisítása | 1 |
DNA lineárisítás tisztítása | |||
In vitro transkripció és ciklizáció | In vitro transkripció és ciklizáció | In vitro transkripció és ciklizációs reakciók | 1-2 |
RNase R feloldás | |||
Optimalizálás - választható | Reakció összetétele, időoptimalizálás | 2-5 | |
circRNA szivárgatása | Konvencionális szűrőmódszer | Lithium-klorid precipitáció | 1 |
Ferromágneses gőz tisztítás | 1 | ||
Magas fokú circRNA szűrőzés | Előkészítő magas teljesítményű folyadék kromatográfia (HPLC) | 1-2 | |
Puffercseré Friedmann | Ultrafiltráció | 1 | |
circRNA lyofilizálása | Minta feltöltés | Töltés | 2-3 |
Liofilizálás | Előre az első hűtés | ||
Elsőszámú szárítás (sublimáció) | |||
Második szárítás (deszorció) | |||
circRNA-LNP befogadás | LNP befészles | Anyag és folyadék előkészítése | 2 |
Mikrofluidikai eszköz keverése | |||
Puffercseré Friedmann | Tangenciális folyamatú szűrődés | 1 | |
Steril | Szűrés | ||
Plazmid DNS minőségbiztosítása | Konzentráció/szükségletesség | Ultraviolett (UV) spektrofotometria | 1-2 |
Plazmid konformáció | Agarozagélszelektrófózis (AGE) | ||
Kapilláris elektroforézis (CE) - Opció | |||
Plazmid azonosítás | Restricziós enzim azonosítás/AGE | ||
Minőségbiztosítás circRNA-ra | Konzentráció/szükségletesség | Ultraviolett (UV) spektrofotometria | - |
Tisztaság | Agarozagélszétválasztó elektroforézis (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC - opció | 1 | ||
CircRNA-LNP minőségbiztosítás | Bezáró hatékonyság | RiboGreen Metódus | 1 |
Részecskeméret | Dinamikus Villámterjedés (DLS) | 1 | |
Polidiszperzitás Index | Dinamikus Villámterjedés (DLS) | 1 | |
Zéta-potenciál | Dinamikus Villámterjedés (DLS) | 1 | |
Sejtalapú Hatékonysági Teszt | Sejt Transzfekció | Sejt elhelyezése, sejt transzfekció | 4 |
Célprotéiniz detektálása | Fluoreszcencia figyelés, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Az eGFP circRNA (erősített zöld fluoreszciós fehérje circRNA), mCherry circRNA, luciferázis circRNA transfekcióját végrehajtottuk a 293T sejtben, és a célprotéint fluoreszciós, fényes vagy színes jelekkel, western blot (WB)-tal, valamint enzim-elleni agglutinációs teszttel (ELISA) detektáltuk.
Sejtbázisú hatásossági vizsgálatok circRNA mintákon a Yaohai Bio-Pharma által