Az 5'-végi sapka az mRNS lényeges módosítása. A cap szerkezetű mRNS-ek, különösen a Cap1 szerkezetek, elősegítik az mRNS-ek, hogy elkerüljék a veleszületett immunválaszokat in vivo, ami hatékony fehérje transzlációt eredményez.
Az enzimatikus capping (a kétlépéses módszer) az mRNS-sapkítás hagyományos módszere, hasonlóan az eukarióta szervezetekben végzett capping folyamathoz. Egy sor enzim hatására a 7-metilguanin (m7G) egy 5'-5' trifoszfát kötésen keresztül kapcsolódik az mRNS 5'-végéhez, és metilezési módosuláson megy keresztül, így a Cap 1 (m7GpppN) sapka szerkezete alakul ki.
A természetes sapkaszerkezet kialakulásának diagramja
Az enzimatikus lezárási reakció folyamata a következő:
A linearizált plazmid DNS-t templátként használják az in vitro transzkripcióhoz (IVT) T7 polimeráz jelenlétében, és 5'-végsapka szerkezetű mRNS képződik egylépéses tisztítás után a vaccinia capping enzim és a 2'-O használatával. -metiltranszferáz.
Szolgáltatások részletei
Választható szolgáltatás |
Szolgáltatás részletei |
Szállítási időszak (nap) |
mRNS enzimatikus kupakolás |
Enzimatikus lezárási reakció |
1 |
Lezárási reakció optimalizálás – opcionális |
Reakciókomponens tervezés és optimalizálás |
3 ~ 7 |
Jellemzők
- A lezárási reakciókomponens tervezése és optimalizálása
A capping reakció komponens optimalizálva van, és az mRNS transzkriptum termelése nagymértékben megnő.
- In vitro expressziós ellenőrzés
A capped mRNS-t 293T-sejtekbe transzfektáljuk, és a célfehérje expressziója kimutatható.
- Az RNáz szigorú szabályozása
Az RNaseson kísérleti környezet és fogyóeszközök szigorú ellenőrzése révén az mRNS lebomlása hatékonyan megelőzhető.
Esettanulmány
A Yaohai Bio-Pharma mRNS platformja tökéletes lezárási reakciófolyamatot épített ki.
Az eGFP mRNS, egy enzimatikus cappeléssel előállított mRNS előtermék esetében a 293T sejtek 24 órás transzfektálása után magas szintű eGFP fluoreszcencia jel (zöld fluoreszcencia) figyelhető meg, amelyet Western Blot (WB) detektálunk, bizonyítva, hogy a célfehérjével fokozott zöld fluoreszcens fehérje (eGFP) hatékonyan expresszálható in vitro.
Enzimatikusan zárt eGFP mRNS expressziója 293T sejtben
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEM
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
