A CircRNS előállításához lineáris RNS-re van szükség prekurzor anyagként (RNS-prekurzor) a ciklizáláshoz, ahol az RNS-prekurzort általában linearizált plazmid DNS-sel állítják elő transzkripciós templátként, és in vitro írják át T7 RNS polimeráz segítségével.
A jó minőségű plazmid DNS elengedhetetlen az in vitro transzkripcióhoz (IVT). Az érett plazmid-előkészítési szolgáltatási platformra alapozva a Yaohai Bio-Pharma nagy tisztaságú és szabványos linearizált plazmid DNS (pDNS) előkészítési szolgáltatást tud nyújtani az IVT termékek integritásának biztosítása érdekében.
Szolgáltatások részletei
| folyamat |
Választható szolgáltatás |
Szolgáltatás részletei |
Szállítási időszak (munkanap) |
| Cirkuláris plazmid készítés |
Génszintézis |
Génszintézis (harmadik fél) |
7-10 |
| Plazmid amplifikáció |
Plazmid amplifikáció |
2 |
| Plazmid extrakció |
| Linearizált plazmid készítés |
Plazmid linearizálás és tisztítás |
Plazmid linearizáció |
1 |
| Linearizációs DNS tisztítás |
| Plazmid DNS minőségellenőrzés |
Koncentráció tisztasága |
Ultraibolya (UV) spektrofotometria |
1-2 |
| Plazmid konformáció |
Agaróz gél elektroforézis (AGE) |
| Kapilláris elektroforézis (CE) - opcionális |
| A plazmid azonosítása |
Restrikciós enzim azonosítása/ AGE |
Jellemzők
- Szabadon vágott sablon plazmid
Linearizálási módszerek rugalmas kiválasztása
- Magas helyreállítási arány
A DNS extrakciós és tisztítási módszerek optimalizálása a magas visszanyerési arány elérése érdekében.
- Szigorú minőség-ellenőrzés
Szigorú folyamatszabályozási szabványok, a plazmidminták szuperhelikális konformációs rátája a kutatáshoz több mint 80%.
Magas színvonalú és nagy hatékonyságú plazmid előkészítési és minőségellenőrzési szolgáltatások a kísérleti igények kielégítésére.
Esettanulmány
Példaként a Yaohai Bio-Pharma mCherry circRNS termékét vesszük figyelembe, a transzkripciós templát plazmidminták szuperspirált aránya (kutatási fokozat) több mint 70%, a linearizációs arány közel 100%.
Az mCherry circRNS-t templátként linearizált plazmiddal állítjuk elő, és 293T-sejtekbe transzfektáljuk. A fluoreszcencia magas szintű expressziója (vörös fluoreszcencia) 24 órás transzfekció után észlelhető, ami 48 óra elteltével fokozódik, és még a transzfekciót követő 7. és 14. napon is kimutatható.
Az mCherry fehérje stabilan és hatékonyan expresszálódik, és a transzkripciós templát tisztasága kiváló minőségben kielégíti a cirrNS gyógyszertermék (DP) követelményét.
Az mCherry cirkRNS in vitro expressziós validálása
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEM
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
