A CircRNA előkészítéshez lineáris RNA-t kell használni mint anyagul (RNA-prekurzor) a ciklizáláshoz, ahol az RNA-prekurzort általában lineáris plázmid-DNA-t használnak transzkripciói sablonként, és in vitro transzkripciós módszerrel előkészíthető T7 RNA-polimeráz segítségével.
Magas minőségű plázmid-DNA szükséges az in vitro transzkripcióhoz (IVT). A matematikusan kidolgozott plázmid-előkészítési szolgáltatási platform alapján a Yaohai Bio-Pharma magas tisztaságú és szabványos lineáris plázmid-DNA (pDNA) előkészítési szolgáltatást biztosítja az IVT-termékek integritásának garantálása érdekében.
A folyamat | Opcionális Szolgáltatás | Szolgáltatás részletei | Szállítási Idő (munkanap) |
Körképző plazmid előkészítése | Gén szintézis | Gén szintézis (Harmadik féltől) | 7-10 |
Plazmid amplifikáció | Plazmid amplifikáció | 2 | |
Plazmid kivonás | |||
Lineáris plazmid előkészítése | Plazmid lineárisítása és tisztítása | Plazmid lineárisítása | 1 |
DNA lineárisítás tisztítása | |||
Plazmid DNS minőségi ellenőrzés | Koncentráció szűzseg | Ultraviolett (UV) spektrofotometria | 1-2 |
Plazmid konformáció | Agarozagélszelektrófózis (AGE) | ||
Kapilláris elektroforézis (CE) - Opció | |||
Plazmid azonosítás | Megkötő enzim azonosítás / AGE |
Lineárisítási módszerek rugalmas kiválasztása
A DNS kivonási és tisztítási módszerek optimalizálása a magas visszaállítási arány eléréséhez.
Szigorú folyamatvezérlési szabványok, több mint 80%-os szuperhelyikális konformációs arány plazmidminták kutatási célból.
Magas szintű és hatékony plazmid előkészítési és minőségbiztosítási szolgáltatások kísérleti igényeknek való megfelelés érdekében.
A Yaohai Bio-Pharma mCherry circRNA termékének példájával, a tranzkripciói sablonplazmidminták (kutatási szint) supercsavarodott aránya több mint 70%, lineárisítási aránnyal majdnem 100%-osan.
az mCherry circRNA lineárisított plazmid sablonnal készül és transfektálva van 293T sejtbe. A transfekció után 24 órában észlelhető magas fluoreszcencia kifejezés (piros fluoreszcencia), amely 48 órával növekedik, és még észlelhető a transfekció utáni hetedik és tizennegyedik napig.
az mCherry-proteinn a stabil és hatékony kifejezés, és az általánosított sablon tisztasága elég magas minőségű circRNA gyógyszeri termék (DP) előállításához.
In vitro kifejezés érvényesítése mCherry circRNA-ra