Az mRNA tömeges termelésének tekintetében az in vitro transkripció (IVT) hatékonyabb és fejlettebb módszer. Az IVT reakció lineáris plazmid-DNAT használ, amely T7 promotor tartalmaz, és mRNA-t szintézál nukleozid trifoszfátumok (NTP-k) alkalmazásával, melyek T7 RNA polimeráz jelenléte esetén szubstrátumként szolgálnak.
A nukleotid módosítás egy áttörés a mRNA kutatásában, ahol a nem módosított mRNA-molekulákat intraceluli RNA érzékelők ismertetik az inborn immunválasz aktiválására. A mRNA életbeli immunogénitás és fordítási hatékonyság szempontjából az IVT folyamat általában bizonyos módosított NTP-kat használ, és gyakori módosított nukleotidok a pseudouridin (Ψ), az N1-metyl-pseudouridin (N1Ψ) és a 5-metyl-citosin (5mC).
In vitro transkripció folyamata mRNA-nál
In vitro transkripció (IVT) reakció diagramja
Szolgáltatások részletei
Opcionális Szolgáltatás |
Szolgáltatás részletei |
Szállítási Idő (munkanap) |
In vitro transzkripció (IVT) |
IVT, In vitro transkripció |
1 |
| Nukleotid módosítások (Ψ/N1Ψ/5mC stb.) |
| DNA-sablon eltávolítása (DNase I) |
IVT feltételek optimalizálása – választható |
IVT reakciókomponensek tervezése és optimalizálása |
2-5 |
Funkcióink
- Diverzifikált nukleotid módosítási stratégia
Az mRNA stabilitásának és a fehérjegyártás in vivo javítása.
- Szigorú Tesztterv és Optimalizálás
az mRNA törzs készítése legfeljebb 10kb-ig elérhető.
Az IVT reakciófeltételek optimalizálásával a transzkripció aránya legfeljebb 1:200.
A RNáz szigorú ellenőrzése a kísérleti környezet és az anyagok révén hatékonyan megakadályozza az mRNA degradációját.
Esettanulmány
Az aktuális IVT reakciórendszer kb. optimalizált a 100 nt hosszúságú szintetikus rendszerekre, nem pedig a tetszőleges hosszúságú mRNÁkra. Minél hosszabb az mRNA-sorozat, annál nehezebb transkribálni és annál inkább veszélyeztetve van a degradációval.
Körülbelül 10 kb hosszúságú testreszabott mRNA-sorozatok előkészítéséhez a Yaohai Bio-Pharma sikeresen felkészítette a minőségi mintákat magas transkripció arányban (1:135), és 1 μg lineáris plazmid in vitro transzkripciója után 135 μg kezdeti tisztított mRNA terméket szereztek meg szigorú kísérleti tervezéssel, folyamatos reakciófeltételek optimalizálásával és szigorú RNáz ellenőrzéssel.
mRNA azonosítás (Agarosz Gelelektrófózissel)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
