Az mRNS tömeges termelése szempontjából az in vitro transzkripció (IVT) hatékonyabb és érettebb módszer. Az IVT reakció a T7 promotert tartalmazó linearizált plazmid DNS-t alkalmazza templátként, és az mRNS-t nukleozid-trifoszfátokkal (NTP-k) szintetizálják szubsztrátként T7 RNS polimeráz jelenlétében.
A nukleotid módosítás áttörést jelent az mRNS feltárásában, ahol az intracelluláris RNS szenzorok felismerik a módosítatlan mRNS molekulákat, hogy aktiválják a veleszületett immunitást. Az mRNS in vivo immunogenitása és transzlációs hatékonysága szempontjából az IVT-eljárás általában bizonyos típusú módosított NTP-ket alkalmaz, és a szokásos módosított nukleotidok a pszeudouridin (Ψ), az N1-metil-pszeudouridin (N1Ψ) és az 5-metilcitozin (5mC).
Az mRNS in vitro transzkripciós folyamata
In vitro transzkripciós (IVT) reakciódiagram
Szolgáltatások részletei
Választható szolgáltatás |
Szolgáltatás részletei |
Szállítási időszak (munkanap) |
In vitro transzkripció (IVT) |
IVT, In vitro transzkripció |
1 |
| Nukleotid módosítások (Ψ/N1Ψ/5mC stb.) |
| DNS-templát eltávolítás (DNáz I) |
IVT állapotoptimalizálás – opcionális |
IVT reakciókomponensek tervezése és optimalizálása |
2-5 |
Jellemzők
- Változatos nukleotid-módosítási stratégiák
Javítja az mRNS stabilitását és a fehérje expresszióját in vivo.
- Szigorú teszttervezés és optimalizálás
Akár 10 kb méretű mRNS fragmentum előállítása is elérhető.
Az IVT reakciókörülmények optimalizálásával a transzkripció sebessége akár 1:200 is lehet.
- Az RNáz szigorú szabályozása
Az RNáz szigorú szabályozása kísérleti környezetben és fogyóeszközökön keresztül hatékonyan megakadályozhatja az mRNS lebomlását.
Esettanulmány
A jelenlegi IVT reakciórendszer nagyjából 100 nt hosszúságú szintetikus rendszerekre van optimalizálva, nem tetszőleges hosszúságú mRNS-ekre. Minél hosszabb az mRNS-szekvencia, annál nehezebb átírni, és annál hajlamosabb a lebomlásra.
Körülbelül 10 kb hosszúságú, testreszabott mRNS szekvenciák elkészítése érdekében a Yaohai Bio-Pharma sikeresen készített kiváló minőségű mintákat magas, 1:135 transzkripciós aránnyal, és 135 μg linearizált plazmid után 1 μg kezdetben tisztított mRNS terméket kapott. in vitro íródott át szigorú kísérleti tervezés, a reakciókörülmények folyamatos optimalizálása és az RNáz szigorú ellenőrzése révén.
mRNS azonosítás (agaróz gél elektroforézis)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEM
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
