A centrális dogma szerint a közvetítő RNA (mRNA) a génanyag átvitelének hídja a DNS-ből a fehérjékre.
az mRNA életben fehérjéket kódol, és a eukariotos szervezetekben a teljesített mRNA öt részből áll: 5' Kapu (fedőstruktúra), 5' UTR (nem kódoló régió), az ORF (nyitott olvasási keret), 3' UTR és 3' polyA farok (polyadenylát farok).
A folyamat | Opcionális Szolgáltatás | Szolgáltatás részletei | Szállítási idő (Nap) |
mRNA Szerkezet Tervezése és Optimalizálása | Kódoló sorozatok tervezése és optimalizálása |
CDS sorozat igazítása CDS kódot optimalizálása |
1 |
Nem kódoló szekvensek tervezése és optimalizálása |
5' UTR sorozat tervezése és optimalizálása 3' UTR sorozat tervezése és optimalizálása polyA sorozat tervezése és optimalizálása |
1-2 |
5’ UTR/3’ UTR |
|
3' PolyA szíf |
|
mRNA komponensek | Biológiai függvények | Optimalizálási stratégiák |
5’ Kap | Védje meg az mRNA-t az exonukleázok által okozott degradációtól, és működjön együtt a 3' végén található polyA farattal, a polyA binderek fehérjével és a fordítás kezdődő fázisának faktor fehérjével a fehérgefordítás indításához. | A természetes Cap1 szerkezet elkerüli a mintafelismerő receptorokat, és így csökkenti a természetes immunválaszt, amelyet egy lépéses transzkripciós fedés vagy kétlépéses enzimatikus fedés segítségével érhet el [lásd részletekért: mRNA enzimatikus fedés és transzkripciós fedés]. |
5’ UTR | A 5' UTR-át a riboszomok felismerik, szabályozzák az mRNA fordítását és befolyásolják az mRNA stabilitását. | Tartalmazzon Kozak sorozatokat anélkül, hogy túl stabil másodlagos szerkezet lenne. A magasabb kifejezésű gének természetes UTR-jei előnyben részesülnek az in vitro transzkripció (IVT) mRNA-k esetében, például az α-globin és β-globin. |
CDS | Fehérgekódoló régiók és kódoló sorozatok antigensek, antitestek vagy más funkcionális fehérjék számára. | A kódot optimalizálás növeli a fordítás szintjét, figyelembe véve, hogy bizonyos nem optimális kódok szerepet játszhatnak a fehérje összefonásában. |
3’ UTR | Szabályozzák az mRNA fordítását és stabilitását. | Természetes UTR-kat használnak inkubációs (IVT) mRNA-k esetén, például az α-globin és β-globin magas kifejezésű geneként. |
3’ polyA farok | Szabályozzák a fehérje kifejezését és védik a fedőstruktúrát a degradációktól. | Megfelelő hosszúság (100-150 bp) szükséges; a transkripciói sablon plazmidján kódolású polyA farok biztosít egy pontosabb polyA farok hosszúságát. |
Több forrású magas kifejezésű természetes és módosított UTR könyvtárak; érett UTR módosítási stratégia;
Együttműködés egy szakértő mesterséges intelligencia algoritmuscsapatával a codonok optimalizálásának befejezésére.
PolyA sorozatok hozzáadása DNA-sablonok szerint az mRNA hosszúság pontosabb ellenőrzéséhez.
Alacsony immunogénitású mRNA hatékony kifejezésének elérésére.
Kétjelzős mRNA sorozat tervezése: mCherry-eGFP mRNA
A Yaohai Bio-Pharma mRNA szolgáltatása folyamatosan fejlődik, és mostantól képes két jelzőgén tandem sorozatot tervezni és optimalizálni, amely képes két gén közös kifejezésére.
Egy konvencionális transzfekciós anyag használatával a kétszeres gén tandem sorozatú mCherry-eGFP mRNA-t befektetik 293T sejtbe, és 48 óra múlva észlelik mindkét fluoreszcens jelet, mCherryt (piros) és az erősített zöld fluoreszcens proteint (eGFP-t), amelyek egyszerre kifejeződnek, és a叠加grafikon sárgára emeli ki.
MCherry-eGFP mRNA kifejezése 293T sejtben