A kétlépéses enzimatikus kapcsolódással összehasonlítva a egylépéses közös-transkripciós kapcsolódási módszer jelentősen csökkenti a folyamatmenetet. A módszer eredményorientált, és kap analógok hozzáadását tartalmazza az in vitro transzkripció (IVT) reakcióhoz. A kap analógok transzkripció kezdetekor lehetnek bevezetve, és kapstrukturával rendelkező mRNA-t lehet szerzni a transzkripció befejezése után. Az aktuális harmadik generációs kap analógok fordított kapcsolódást elkerülnek, és közvetlenül Cap 1 struktúrát adnak a transzkripció termékéhez.
Az mRNA in vivo immunogéniségének és fordítási hatékonyságának figyelembevételével az IVT folyamat gyakran bizonyos módosított NTP-ket alkalmaz, és a gyakori módosított nukleotidok a falsz uridin (Ψ), N1-methyl-falsz-uridin (N1Ψ) és 5-metyl-citosin (5mC).
Ábra: Diagram az mRNA ko-transkripciós és kalapozási reakciókról
Szolgáltatás részletei
Szolgáltatás |
Szolgáltatás részletei |
Szállítási Idő (munkanap) |
Ko-transkripciós kalapozás |
In vitro transzkripciós válasz (Tisztított Kalap analogon) |
1-2 |
| Nukleotid módosítások (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNA-sablon eltávolítása (DNase I) |
IVT feltételek optimalizálása – választható |
Reakciós komponensek tervezése és optimalizálása |
3-7 |
Funkcióink
- Diverzifikált nukleotid módosítási stratégia
Többféle választékony nukleotid módosítási stratégia javíthatja a proteinn kifejezését.
- Optimalizált reakciós rendszer
Magas transkripció arány elérésére és magas fedettségi hatékonyságra.
- Stabil fedettségi folyamat
Több mint 95%-os fedettségi arány elérése.
Hatékonyan megakadályozza az mRNA degradációját a kísérleti környezet és anyagok szigorú RNáz-ellenőrzésével.
Esettanulmány
A Yaohai Bio-Pharma kidolgozott egy érett közös transkripciós fedettségi folyamat platformot, tisztított kap analógokat használva, amelyek közvetlenül adnak Cap1 struktúrát, miközben elkerülik az inverz fedetést. A szabványosított minta előkészítés és kapilláris elektroforézis (CE) detektálás után az enyhített zöld fluoreszcens fehérjé (eGFP) mRNA fedettségi aránya több mint 95%-ra juthat.
az eGFP mRNA fedettségi hatékonysága több mint 95%
Az eGFP mRNA és mCherry mRNA, amelyek kotranskripciós fedettsel lettek előkészítve, transzfectálva vannak 293T sejtökbe, illetve 48 óra múlva erős fluoreszcens jelet figyelnek meg, ami arra utal, hogy az mRNA hatékonyan fejeződik ki a 293T sejtökben.
EGFP mRNA és mCherry mRNA kifejezése 293T sejtben
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
