A diszulfidkötéseket néha SS-kötéseknek vagy diszulfidhidaknak is nevezik. A diszulfid hidak befolyásolják a biológiai anyagok, például a peptidek, fehérjék és antitestek bioaktivitását.
A Yaohai Bio-Pharma főként folyadékkromatográfiás tömegspektrometrián (LC-MS) alapuló diszulfidkötés-elemzési szolgáltatásokat kínál.
Részt vettünk különböző nagy molekulák fehérjeszerkezeti jellemzésében, beleértve a rekombináns alegység vakcinákat, nanotesteket/VHH-kat/ egydoménes antitesteket (sdAb-okat), ellenanyag-fragmenseket, hormonokat/peptideket, citokineket, növekedési faktorokat (GF), enzimeket, stb.
A diszulfidkötésekre vonatkozó szabályozási követelmények
Különböző biológiai anyagokban különböző számú és képződő diszulfidhidak találhatók, amelyeket a fehérjekarakterizációs vizsgálatok során teljes mértékben fel kell mérni, ha a termék várható elsődleges aminosavszekvenciája tartalmazza a cisztein aminosavat. Ezt az ICH Topic Q6B szabályozó dokumentum is előírja.
Analitikai módszerek
Elemzés |
Mód |
Diszulfid kötések |
Folyadékkromatográfia-tömegspektrometria (LC-MS) emésztés után |
A diszulfidhidak és a szabad tiolok teljes körű értékeléséhez szükséges adatok érdekében a Yaohai Bio-pharma tudósai peptid-térképezést végeznek specifikus proteázzal végzett emésztés után. Ezt követően a redukció előtt és azt követően online LC/elektrospray ionizációs tömegspektrometriával (ES-MS) és/vagy LC/ES-MS/MS-sel elemezze.
A Yaohai Bio-pharma el tudja végezni az Ellman-tesztet is, amely fontos része minden teljesen ciszteint tartalmazó termék értékelésének. Az Ellman-tesztben a szulfhidrileket (5,5'-ditio-bisz-[2-nitrobenzoesav]) derivatizáljuk. A szabad tiolok szintjének meghatározásához a kapott terméket UV-spektrofotometriával elemezzük 412 nm-en.