A folyékony kromatográfia-tömegspektrometria (LC-MS) alapú peptid térképzési adatok nagy mennyiségű információt biztosítanak az eredeti és rekombináns fehérjék elsődleges és magasabbrendű szerkezetről, beleértve az amino sav sorozat-fedettséget, a poszt-transzlációs módosításokat (PTMs, például: glikoziláció, oxidáció, deamidáció), diszulfídszüneteket, stb.
A Yaohai Bio-Pharma肽 térképzési elemző szolgáltatásokat kínál LC-MS segítségével a célféhérjére vonatkozóan, hogy gyorsítsa elő a kutatásait a fehérjének szerkezetével kapcsolatban.
Részvettünk egyéb nagy molekulák fehérjei szerkezetének jellemzésében, beleértve a Rekombináns Alfejtény Oltásokat, Nan Testek/VHH-k/Egyszerűszerű Antitestek (sdAbs), Antitest Törések, Hormonok/Peptidok, Cytokinok, Növekedési Faktorok (GF), Enzymek, Kollagensek, stb.
Szabályozási követelmények a Peptid Térképezéshez
Az ICHQ6B útmutató ajánlja, hogy „a termék kiválasztott felosztása diszkrét peptidként alkalmas enzimek vagy kémiai anyagok használatával történik, és az eredményül kapott peptidfragmentumokat HPLC-szel vagy más megfelelő analitikai eljárással elemzik. A peptidfragmentumokat akkor is lehet azonosítani, ha lehet, például aminosav-összetégi elemzéssel, N-végeselemes sorozatképzéssel vagy tömegspektrometriával (MS). Az aktív anyag vagy gyógyszer termék (DP) peptid térképe egy alkalmasan validált módszerrel való kidolgozása gyakran használatos a kívánt termékszerkezet megerősítésére a savari kiadáskor.”
Elemző módszerek
| Elemzés |
Módszerek |
| Peptid térképezés |
Proteázis feldarabolás és folyadék-kromatográfia-tömegspektrometria (LC-MS) |
Analitikai eljárás
1. Redukció és alkiláció
A cél a disszulfid-hídak csökkentése és a létrejött szabad tióhímód blokkolása. A disszulfid-hídak csökkentése segít a fehérjéstruktúra nyitásában, ami nagyobb hatékonyságot eredményez a proteolitikus feldarabolás során. Ez a lépés megsemmisíti a hídot a láncok között a többi láncos fehérjék esetében, amelyeknek disszulfid-hídban összekapcsolt láncai vannak (pl. monoklonális antitestek, mAbs).
2. A fehérjék enzimekkel történő feldarabolása
A cél a fehérjék peptidökbe történő felosztása. Az enzimeket a fehérjének elméleti sorozatára és az enzimek által történő fehérjéfeldarabolásról származó ismeretek alapján választottuk ki. Ezen enzimek kiválasztásával a legjobb peptid térképes elemzést kell elérni.
3. A feldarabolódott peptidök elemzése On-line fordított fázis-HÁGK használatával Ultraviolett (UV) és Elektrospray-Tömegspektrometriai érzékeléssel (LC/ES-MS).
Peptid-elválasztás polaritás alapján LC-n (fordított fázis-LC)
Ahogy a peptid kiszivárgatkozik az LC oszlopról, a tömegspektrométer generál tömegi adatokat és törésvonzony-információkat, amelyek lehetővé teszik számunkra, hogy meghatározzuk a sorozati információkat. A sorozati információkat használjuk a peptid azonosításának megerősítésére és elsődleges információk biztosítására.
Továbbá a törésvonzony-információkat is generálhatjuk a peptidből, amikor az az LC oszlop róla a tömegspektrométer forrásába lép. A tanulmány követelményeitől függően ez vagy selektív LC-MS/MS, vagy nem selektív, ami egyfajta tandems MS-ként tekinthető.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
