Az N-glikozilációs hely elfoglaltsága fiziológiai jellemző a glikoproteineknek, és főként N-glikánt termel. A Yaohai Bio-Pharma N-glikozilációs hely elfoglaltságának elemzési szolgáltatása végre lett hajtva trágyázással, kiengedéssel, bővítéssel és elemzéssel Folyékony Cromatográfia-Elektrospray Ionenizáció Massa Spektrometria-Massa Spektrometria (LC-ESI-MS/MS) segítségével.
Részvettünk egyéb nagy molekulák fehérjei szerkezetének jellemzésében, beleértve a Rekombináns Alfejtény Oltásokat, Nan Testek/VHH-k/Egyszerűszerű Antitestek (sdAbs), Antitest Törések, Hormonok/Peptidok, Cytokinok, Növekedési Faktorok (GF), Enzymek, Kollagensek, stb.
Szabályozási követelmények az N-glikozilációs hely elfoglaltságához
Az ICH Q6B irányelv szerint: „glykoproteine esetén a szénszervezet tartalmát (netó szugarakat, aminoszugarakat és sialinsavakat) meghatározzák. Továbbá a szénszervezet láncok struktúráját, az oligoszacharid mintát (antennaprofilját) és a polipeptidlánc glykoszilációs helyét elemzik a lehető legnagyobb mértékben.”
Elemzői módszer
| Elemzés |
Módszerek |
| N-glikozilációs hely foglaltsága |
LC-MS deglikozidáz és proteáz hasítás után |
Eljárások
1. A fehérjék fehérje-hasítása kis peptidfragmentumok létrehozására.
2. N-glican felszabadítása endoglikozidáz H vagy PNGase F használatával. Az endoglikozidáz H a kötést törli a két GlcNAc-rezidusz között az N-hivatkozott glicanok magjában, míg a PNGase F egy glikoamidáz, amely a GlcNAc és Asn közötti kötést törli, így a teljes cukorláncot felszabadítja, és az Asn-t Asp-ba alakítja 1-Da tömegnövekedéssel.
3. N-glicapeptid bősítése HILIC (Hydrofilikus Interakcióos Folyadékromatográfia) segítségével
4. Az N-hivatkozott glykosziláció helyének foglalásának elemzése LC-ESI-MS/MS-sel.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
