Az N-glikozilációs hely elfoglalása a glikoproteinek élettani jellemzője, és főként N-glikánt termel. A Yaohai Bio-Pharma N-glikozilációs hely foglaltsági elemzési szolgáltatása emésztés, felszabadulás, dúsítás és folyadékkromatográfiás-elektrospray ionizációs tömegspektrometria-tömegspektrometria (LC-ESI-MS/MS) elemzéssel történik.
Részt vettünk különböző nagy molekulák fehérjeszerkezeti jellemzésében, beleértve a rekombináns alegység vakcinákat, nanotesteket/VHH-kat/ egydoménes antitesteket (sdAb-okat), ellenanyag-fragmenseket, hormonokat/peptideket, citokineket, növekedési faktorokat (GF), enzimeket, stb.
Szabályozási követelmények az N-glikozilációs hely elfoglaltságára vonatkozóan
Az ICH Q6B irányelve szerint „glikoproteinek esetében a szénhidráttartalmat (semleges cukrok, aminocukrok és sziálsavak) határozzák meg. Ezenkívül a lehető legjobban elemezzük a szénhidrátláncok szerkezetét, az oligoszacharid mintázatot (antennáris profil) és a polipeptidlánc glikozilációs helyét.
Analitikai módszer
| Elemzés |
Mód |
| N-glikozilációs hely elfoglalása |
LC-MS deglikoziláz és proteáz emésztés után |
Eljárások
1. A fehérjék fehérje emésztése kis peptidfragmensek előállítására.
2. N-glikán felszabadulás endoglikozidáz H vagy PNGáz F használatával. Az endoglikozidáz H felhasítja a kötést a két GlcNAc csoport között az N-kapcsolt glikánok magjában, míg a PNGáz F egy glikoamidáz, amely megszakítja a kötést a GlcNAc és az Asn között, felszabadítva a teljes kötést. cukorláncot és az Asn-t Asp-vé alakítva 1-Da tömegnövekedéssel.
3. N-glikopeptid dúsítás HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography) segítségével
4. Az N-kapcsolt glikozilációs hely elfoglaltságának elemzése LC-ESI-MS/MS segítségével.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEM
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
