MRNA in vitro szintézise
Az mRNA fő összetevői a 5’-fedő, 5’-UTR, nyitott olvasási keret (ORF), 3’-UTR és 5’ poli-A csomópont, amelyek szükségesek az mRNA funkció megőrzéséhez. A kutatók számos módszert alkalmaztak az mRNA-sorozatok és szerkezetek azonosítására és optimalizálására.
Az mRNA szintézisének az in vitro transkript (IVT) eljárás alapján hajtják végre lineáris DNA-sablonok, RNA-polymerázok (T3, T7 vagy SP6), nem módosított vagy módosított nukleotidok, enzimek és megfelelő reagenszek használatával.
5’ fedő módosítás
A fejlődő mRNA sorozatai a eukariotos cellából egy 7-metilguanin (m7G) kalapot mutatnak a 5’ végén, ami növeli az mRNA stabilitását és fordítási hatékonyságát. Két fő módszer létezik az mRNA in vitro rögzítésére. Először is, az mRNA-t in vitro transkripció közben lehet kalapozni, ha hozzáadjuk az m7GpppG szerkezetű kalap analogonját (pl., CleanCap) az IVT-rendszerhez. Ez a transkripciós kalapozási módszer természetes 5' kalapszerkezetet biztosít és majdnem 90-99%-os kalapozási hatékonyságot ér el. Másodszor, az mRNA térképezését in vitro transkripció után is elvégezhetjük enzimreakciókkal.
PolyA Módosítás
A poly(A) szála növeli az mRNA féligélettartamát életben és javítja az mRNA fordítás hatékonyságát. A bővített poly(A) szála hossza 100-300 nukleotid kell legyen. Emellett a módosított adenoszín növeli a poly A szála stabilitását a sejtbeli RNáz degradáció ellen. A poly A szálat in vitro transkripcióval lehet beszúrni poly A kódot tartalmazó DNA-sablon használatával, ami egy adott poly A szekvencia hosszhoz vezet. Az enzimatikus poliadenyálás után az mRNA-transzkripcióra is használható rekombináns poly A polymeráz.
Nukleotidok Módosítása
A módosított nukleozidok megakadályozhatják a mintafelismerő receptorok (PRR) felismerését és/ vagy aktiválását, és két teljesen különböző módon növelhetik az mRNA-oltalom hatékonyságát. A bizonyos kémiai módosított nukleozidok, beleértve a pseudouridint (ψ), a 1-methylpseudouridint (m1ψ), a thiouridint (s4U) és a 5-methylcytosint (m5C) hozzáadása megakadályozza a TLR7/8 és más inborn immunreceptorok aktiválását, ami jelentősen csökkenti az mRNA immunogénitását.
mRNA Szállítási Rendszer
Az mRNA funkció megtartása érdekében be kell szűnnie a gazdacytoplazmába és specifikus antigenseket kell kifejeznie. Az mRNA oltóanyagok és terápiák egyik legnagyobb kihívása az mRNA célsejtekbe történő szállítása elég magas fordítási szinttel, amire nagyon specifikus és hatékony mRNA szállítási rendszerekre van szükség. Több mRNA szállítási vektor fejlesztésre került és használatban van, beleértve a dendritikus sejtet (DCs), a protamin-et, a katiónos polimereket és a katiónos liposzomaokat.
A kationikus zsírszervek komplexei az mRNA-val és más előkészületekkel együtt 80-200 nm méretű nanocsavarokat, az úgynevezett lipid nanocsavarokat (LNP) alkothatnak. Az egyik legfejlettebb mRNA-szállítási rendszer a LNP, amely ionizálható kationikus zsírszerveket, természetes foszfolipidokat, cholesterol-t és poli-etilen-glykol (PEG)-t tartalmaz. Több RNA oltás és terápia (siRNA és mRNA), amelyeket az Egyesült Államok Élelmiszer- és Gyógyszer-igazgatósága (FDA) engedélyezett, LNP szállítási rendszerrel alapoznak.
Yaohai Bio-Pharma Egy Állomásos Megoldást Kínál az RNA-ra
Rendeltetési Terjesztés
|
Osztály
|
Átadandó Eredmények
|
Specifikáció
|
Alkalmazások
|
|
nem-GMP
|
Gyógyszeranyag, mRNA
|
0,1~10 mg (mRNA)
|
Előklinikai kutatás, például sejttranszfekció, Analitikus módszerfejlesztés, Előstabilitásvizsgálatok, Formulációs fejlesztés
|
|
Drogtermék, LNP-mRNA
|
|
GMP, Sterilitás
|
Gyógyszeranyag, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Kutatási új gyógyszer (IND), Klinikai vizsgálat engedélye (CTA), Klinikai vizsgálati ellátás, Biológiai engedélyajánlás (BLA), Kereskedelmi ellátás
|
|
Drogtermék, LNP-mRNA
|
5000 vial vagy előtöltött sziring/kréta
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
