Enzimas para la producción de ARNm

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Enzimas para la producción de ARN

Enzimas clave para la producción de ARN largo

El ARNm, como tipo de ARN de codificación larga, funcionó de forma segura y eficiente en una gama más amplia de personas durante la COVID-19. Otros ARN de codificación larga, como el ARN autoamplificador (saRNA) y el ARNm circular (circRNA), también mostraron eficacia en estudios preclínicos y clínicos.

La producción a gran escala de ARN de codificación larga se basa en la transcripción in vitro (IVT) mediante varias reacciones enzimáticas. Los pasos de la producción de ARN incluyen la preparación del molde de ADN, la síntesis de ARN IVT, la circulación, la eliminación de ADN, la modificación del ARN (cobertura y cola) y la purificación del ARN.

Hay varias enzimas clave utilizadas en la producción de ARN de codificación larga (p. ej., ARNm, ARNsa y ARNcirc), incluidas endonucleasas de restricción, ARN polimerasa T7 (ARNAP T7), inhibidor de ARNasa, pirofosfatasa inorgánica, ADNasa I, enzima limitadora de vaccinia y ARNasa R.

Procesos	Enzima	Función
Preparación de ADN plantilla	Endonucleasas de restricción	Linealización del ADN plasmídico (pDNA) para evitar generar una transcripción más larga.
Síntesis de ARN IVT	ARN polimerasa T7 (T7 RNAP)	Se une al promotor T7 y genera una transcripción de ARN específica; Desempeña un papel clave durante la reacción IVT.
	Inhibidor de RNasa, recombinante	Inhibe la actividad de la RNasa durante la reacción IVT.
	Pirofosfatasa inorgánica (iPPase)	Prevenir el pirofosfato durante la reacción IVT.
eliminación de ADN	DNasa I	Retire la plantilla de ADN.
modificación de ARN	Enzima bloqueadora de vaccinia	Agregue estructuras Cap1 a los extremos 5' del ARNm de IVT.
modificación de ARN	2'-O-Metiltransferas	Agregue estructuras Cap1 a los extremos 5' del ARNm de IVT.
enriquecimiento de ARN circular	ARNasa R	Digiere el ARN lineal y enriquece el ARN circular.

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