Síntesis de ARNsa personalizada
El ARNm autoamplificador (saRNA), también conocido como ARN replicón, codifica secuencias de ARNm de transcripción in vitro (IVT) y genes de replicasa viral derivados de alfavirus o flavivirus. Los genes de replicasa viral permiten la autoamplificación del ARNm, lo que da como resultado una mayor expresión de proteínas y una dosis mínima requerida de ARN en comparación con los ARNm que no se amplifican. Otro aspecto es que el saRNA es una molécula relativamente grande (más de 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma ha establecido un conjunto de tecnologías de síntesis de ARNm para proporcionar ARNm no amplificado y ARNm autoamplificador (1000 nt ~ 14000 nt), como diseño y optimización de secuencias, IVT, purificación, liofilización y encapsulación de nanopartículas lipídicas (LNP). . Todos los productos se lanzan bajo estrictos estándares de control de calidad.
Fig.1 Características estructurales de los ARNm de IVT: ARNm convencional, circular y autoamplificador.
Características de la secuencia del ARNm autoamplificador
El ARN autoamplificador comprende cuatro proteínas no estructurales (designadas como nsP1, nsP2, nsP3 y nsP4), que se derivan de los alfavirus, el virus de la encefalitis equina venezolana (VEEV). Entre estos, nsP1 exhibe actividades enzimáticas duales, a saber, GTasa y N7MTasa, mientras que nsP2 posee actividad RTPasa, fundamental para limitar el ARNm de IVT para generar la estructura Cap 0. Además, nsP2 actúa como proteasa y helicasa, lo que facilita el procesamiento complejo de todo el complejo nsP. La función precisa de nsP3 sigue siendo difícil de alcanzar, pero participa en interacciones con diversas proteínas de la célula huésped, contribuyendo así a la atenuación de la respuesta antiviral montada por el huésped.
Una región promotora subgenómica (SGP) de alfavirus se ubica antes del gen de interés (GOI). El elemento SGP facilita el inicio de la transcripción GOI al evitar la lectura de la secuencia que codifica las proteínas nsP virales.
Fig.2 Síntesis y ensayos celulares de eGFP saRNA de la plataforma Yaohai Bio-Pharma RNASci.
Soluciones personalizadas de saRNA
El protocolo de síntesis de saRNA es similar al del mRNA: Síntesis de ARNm personalizada
- Diseño de secuencia
- Preparación de la plantilla de plásmido
- transcripción in vitro (TIV)
- Tapado enzimático de ARNm
- Limitación de cotranscripción de ARNm
- Purificación de ARNm
- Liofilización de ARNm
- Encapsulación LNP
- Análisis y pruebas
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