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Preparación de Proteínas sin Etiqueta

Preparación de Proteínas sin Etiqueta

Las etiquetas de proteínas, como asociados de fusión utilizados en tecnologías de ADN recombinante, permiten una purificación por afinidad efectiva en un solo paso para diversas proteínas/péptidos con diferentes características. A pesar de esta importante ventaja, las etiquetas como aminoácidos exógenos pueden alterar la estructura de la proteína y sus funciones biológicas. Por lo tanto, las proteínas o péptidos sin etiqueta (tag-free) son más preferidos para garantizar la seguridad y eficacia, especialmente en el campo biofarmacéutico. Una proteína recombinante con una etiqueta de fusión tiene posibilidades limitadas de obtener autorización de agencias médicas/administradoras de medicamentos.

Basado en la plataforma de I+D de biológicos microbianos, Yaohai Bio-Pharma ofrece servicios personalizados de preparación de proteínas sin etiqueta (Tag-free) dedicados a cumplir objetivos únicos para investigación, desarrollo y fabricación para uso clínico.

Palabras clave: producción de proteínas sin etiqueta, purificación de proteínas no etiquetadas, preparación de proteínas basada en etiquetas libres, expresión y purificación de proteínas sin etiqueta, proteína objetivo altamente libre de etiqueta

Aplicación: investigación de medicina humana, desarrollo de medicina veterinaria, desarrollo de vacunas recombinantes, producción de biológicos de moléculas grandes recombinantes

Nuestra Plataforma Microbiana de I+D

Contamos con experiencia en ingeniería de cepas microbianas, fermentación y purificación de productos.

Bacterias: Escherichia coli (E. coli)

Levadura: Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha)

Opciones Personalizadas
Modalidad Proteína Recombinante
Materiales Iniciales Secuencias de genes, plásmido recombinante u cepas diseñadas
Entregables Purificar: >80%, >85%, >90% Cantidad: 0.2~10 g (a determinar por el proyecto)
Sistema de Expresión y Formación

E. coli secreción periplasmática, expresión soluble y cuerpo de inclusión;

Expresión intracelular o secreta de levadura

Métodos de análisis Ultravioleta (UV), ensayo de ácido bicinconínico (BCA), Bradford u Lowry para cantidad
Electroforesis en gel de poliacrilamida con sulfato de dodecilo de sodio (SDS-PAGE) para pruebas de purificación
Opcional: Western blot (WB), ensayo inmunoenzimático (ELISA), cromatografía líquida de alta rendimiento (HPLC)
Impurezas residuales Endotoxina (opcional)
Detalles del Servicio

Servicios

Detalles del Servicio

Línea de tiempo mínima (días hábiles)

Síntesis de genes

Optimización de codones para un hospedador de expresión específico

7~10 días

Síntesis de genes

Construcción de plásmido/vectores

Clonación en plásmido/vectores

2 días

Transformación de plásmidos

Verificación por reacción en cadena de la polimerasa (PCR), digestión con enzimas de restricción, secuenciación de genes

3 días

Expresión de proteínas en E. coli

Transformación de plásmidos,

2 días

Cultivo en frasco agitado

3 días

fermentación a escala de 7L, optimización

4 días/lote

Purificación de proteínas sin etiqueta, optimización

5~10 días/lote

Prueba mediante electroforesis en gel de poliacrilamida con sulfato de dodecilo de sodio (SDS-PAGE)

Expresión de proteínas en levadura

Preparación de células competentes de levadura

4 días

Linealización de plásmidos y electro-transformación

fermentación a escala de 7L, optimización

5 días

Purificación de proteínas sin etiqueta, optimización

7 días/lote

Purificación de proteínas sin etiqueta

5~10 días/lote

Control de calidad por SDS-PAGE

Servicios Adicionales (Opcionales)
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