Los enlaces de disulfuro a veces se llaman enlaces S-S o puentes de disulfuro. Los puentes de disulfuro afectan la bioactividad de los biológicos, como péptidos, proteínas y anticuerpos.
Yaohai Bio-Pharma ofrece servicios de análisis de enlaces de disulfuro basados principalmente en Cromatografía Líquida-Espectrometría de Masas (LC-MS).
Hemos estado involucrados en la Caracterización Estructural de Proteínas de varias grandes moléculas, incluidas Vacunas Recombinantes de Subunidades, Nanocuerpos/VHHs/ Antibodies de Dominio Único (sdAbs), Fragmentos de Antibody, Hormonas/Péptidos, Citocinas, Factores de Crecimiento (GF), Enzimas, Colágenos, etc.
Requisitos Regulatorios para los Enlaces de Disulfuro
Existen diferentes números y formaciones de puentes de disulfuro en diferentes biológicos, los cuales deben ser evaluados completamente durante los estudios de caracterización de proteínas si la secuencia primaria de aminoácidos esperada del producto contiene el aminoácido cisteína. Esto también es requerido por el documento regulatorio ICH Topic Q6B.
Métodos Analíticos
| Análisis |
Métodos |
| Enlaces de Disulfuro |
Cromatografía Líquida - Espectrometría de Masas (LC-MS) después de la digestión |
Para los datos necesarios para una evaluación completa de los puentes disulfuro y tioles libres, los científicos de Yaohai Bio-pharma realizan un mapeo de péptidos post-digestión con una proteasa específica. Posteriormente, se analiza utilizando LC/Electrospray Ionización Espectrometría de Masas (ES-MS) y/o LC/ES-MS/MS antes y después de la reducción.
Yaohai Bio-pharma también puede realizar la prueba de Ellman, que es una parte importante de cualquier evaluación completa de productos que contienen Cisteína. Dentro de la prueba de Ellman, derivatizamos los sulfhidrilos usando (5,5’-ditiobis-[2-nitrobenzoato]). Para determinar los niveles de tioles libres, el producto resultante se analiza por espectrofotometría UV a 412nm.
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