Los enlaces disulfuro a veces se denominan enlaces SS o puentes disulfuro. Los puentes disulfuro afectan la bioactividad de productos biológicos, como péptidos, proteínas y anticuerpos.
Yaohai Bio-Pharma ofrece servicios de análisis de enlaces disulfuro basados principalmente en cromatografía líquida-espectrometría de masas (LC-MS).
Hemos estado involucrados en la caracterización estructural de proteínas de varias moléculas grandes, incluidas vacunas de subunidades recombinantes, nanocuerpos/VHH/anticuerpos de dominio único (sdAb), fragmentos de anticuerpos, hormonas/péptidos, citocinas, factores de crecimiento (GF), enzimas, colágenos. etc.
Requisitos reglamentarios para enlaces disulfuro
Hay diferentes números y formaciones de puentes disulfuro en diferentes productos biológicos, lo que debe evaluarse completamente durante los estudios de caracterización de proteínas si la secuencia de aminoácidos primaria esperada del producto contiene el aminoácido cisteína. Esto también se requiere en el documento reglamentario ICH Topic Q6B.
Métodos analíticos
| Analisis |
Métodos |
| Enlaces disulfuro |
Cromatografía líquida-espectrometría de masas (LC-MS) después de la digestión |
Para obtener los datos necesarios para una evaluación completa de los puentes disulfuro y los tioles libres, los científicos de Yaohai Bio-pharma realizan un mapeo de péptidos después de la digestión con una proteasa específica. A continuación, analice utilizando LC/espectrometría de masas por ionización por electropulverización (ES-MS) en línea y/o LC/ES-MS/MS antes y después de la reducción.
Yaohai Bio-pharma también puede realizar la prueba de Ellman, que es una parte importante de cualquier evaluación de un producto que contenga totalmente cisteína. Dentro de la prueba de Ellman, derivatizamos sulfhidrilos usando (ácido 5,5'-ditio-bis-[2-nitrobenzoico]). Para determinar los niveles de tioles libres, el producto resultante se analiza mediante espectrofotometría UV a 412 nm.
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