El ARN circular (circRNA) ha sido ampliamente utilizado en el estudio de funciones de genes o proteínas. Al mismo tiempo, es popular en el desarrollo de biológicos preventivos y terapéuticos, similar al ARNm.
Yaohai Bio-Pharma ha establecido un conjunto de tecnologías de síntesis de circRNA para proporcionar ARN de alta calidad, como diseño y optimización de secuencia, transcripción in vitro (IVT), ciclización, purificación y encapsulación con nanopartículas lipídicas (LNP). Todos los productos se liberan bajo estrictos estándares de control de calidad (QC).
En comparación con el ARN mensajero lineal, el ARN circular (circRNA) es más estable en estructura y es un gran punto de interés en la investigación actual de medicamentos de ácido nucleico. Tiene una amplia gama de aplicaciones en diferentes campos, ya sea como circRNA codificante o no codificante, incluidas las vacunas preventivas para enfermedades infecciosas, vacunas oncológicas terapéuticas, fármacos oncológicos terapéuticos, terapia de reemplazo de proteínas, medicina regenerativa, terapia celular y génica (CGT), función de esponja molecular y aptámeros de ARN.
Proceso | Servicio opcional | Detalles del Servicio | Plazo de Entrega (Día) |
diseño y Optimización de Secuencias de circRNA | Diseño y optimización de secuencias codificantes | Optimización de codones CDS | 1 |
Diseño y optimización de secuencias no codificantes | Diseño y Optimización de Secuencias de Intrón y Exón, Brazo Homólogo y Espaciador | 1-2 | |
Preparación de Plásmido Circular | Síntesis de genes | Síntesis de Genes (Terceros) | 7 a 10 |
Amplificación de Plásmidos | Amplificación de Plásmidos | 2 | |
Extracción de Plásmidos | |||
Preparación de Plásmidos Linealizados | Linealización y purificación de plásmidos | Linealización de plásmidos | 1 |
Purificación de ADN Linealizado | |||
Transcripción In Vitro y Ciclización | Transcripción In Vitro y Ciclización | Reacciones de Transcripción In Vitro y Ciclización | 1-2 |
Digestión con RNasa R | |||
Optimización-opcional | Composición de la Reacción, Optimización de Tiempo | 2-5 | |
purificación de circRNA | Método Convencional de Purificación | Precipitación con cloruro de litio | 1 |
Purificación con beads magnéticos | 1 | ||
Purificación Altamente Purificada de circRNA | Cromatografía Líquida de Alto Rendimiento (HPLC) Preparativa | 1-2 | |
Intercambio de buffer | Ultrafiltración | 1 | |
liofilización de circRNA | Relleno de Muestra | Envasado | 2-3 |
Liofilización | Precongelación | ||
Secado primario (sublimación) | |||
Secado secundario (desorción) | |||
encapsulación de circRNA-LNP | Encapsulamiento en LNP | Pretratamiento de Materiales y Líquidos | 2 |
Mezcla en Dispositivo Microfluido | |||
Intercambio de buffer | Filtración de Flujo Tangencial | 1 | |
Esterilizar | Filtración | ||
Control de calidad de ADN plasmidial | Concentración/pureza | Espectrofotometría Ultravioleta (UV) | 1-2 |
Conformación de plásmido | Electroforesis en Gel de Agarosa (AGE) | ||
Electroforesis Capilar (CE)-Opcional | |||
Identificación de plásmidos | Identificación de Enzima de Restricción/AGE | ||
Control de calidad de circRNA | Concentración/pureza | Espectrofotometría Ultravioleta (UV) | - |
Pureza | Electroforesis en Gel de Agarosa (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC-opcional | 1 | ||
Control de Calidad de circRNA-LNP | Eficiencia de encapsulación | Método RiboGreen | 1 |
Tamaño de partícula | Dispersión de Luz Dinámica (DLS) | 1 | |
Índice de Polidispersidad | Dispersión de Luz Dinámica (DLS) | 1 | |
Potencial Zeta | Dispersión de Luz Dinámica (DLS) | 1 | |
Ensayo de Potencia Celular | Transfección Celular | Platado celular, transfección celular | 4 |
Detección de Proteína Objetivo | Observación de fluorescencia, Western Blot/ELISA | 1 a 3 |
Transfectamos circRNA de proteína fluorescente verde mejorada (eGFP circRNA), mCereza circRNA, luciferasa circRNA en células 293T, y detectamos la proteína objetivo a través de señales de fluorescencia, lumínica o de color, western blot (WB), ensayo inmunoenzimático ligado (ELISA).
Ensayos de Potencia Celular de Muestras circRNA por Yaohai Bio-Pharma