ADN plasmídico, como in vitro transcripción (IVT) plantilla, es un material crudo importante para la fabricación de ARNm. Un alto rendimiento, alta pureza y alta recuperación del ADN plasmídico son los principales objetivo durante el desarrollo del proceso plasmídico.
Yaohai Bio-Pharma ofrece una solución integral para el desarrollo de plásmidos, incluyendo procesos aguas arriba (fermentación), procesos aguas abajo (purificación) desarrollo, caracterización del proceso y validación del proceso. Contamos con amplia experiencia en mejorar el rendimiento del plásmido y aislarlo de matrices complejas mediante el desarrollo y optimización de procesos de fermentación, purificación y eliminación de impurezas.
El proceso biológico básico para la fabricación de plásmidos incluye: Escherichia coli (E. coli) fermentación, recolección celular y lisado alcalino, clarificación, concentración, proceso cromatográfico de tres pasos (captura, purificación intermedia y pulido), y concentración.
Detalles del Servicio | Operaciones Unitarias | Parámetros |
E. coli fermentación |
Frasco de Agitación | Composiciones de medios, antibiótico, volumen de inóculo, temperatura de crecimiento y etc. |
Fermentador (7 L) |
Antibiótico, volumen de inóculo, temperatura de crecimiento, pH, oxígeno disuelto (OD), modo de alimentación (p. ej., batch con alimentación), medios de alimentación, tiempo de fermentación y etc. |
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Cosecha de Células | Microfiltración | Estándar E. coli proceso de cosecha |
Lisis Celular | Re suspensión celular, lisis alcalina, neutralización | Proporción de álcali, tiempo de lisis |
Clarificación | Filtración | Filtración cruda, 20 µm y un filtro de 5 µm (preferido) |
Concentración | Ultrafiltración, filtración de flujo tangencial | Tamaño de poro (o NMWC), presión transmembrana (TMP), Flujo, relación volumen de filtrado a área de membrana |
Cromatografía en tres pasos | Cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) o cromatografía de filtración gel (GFC) | Longitud y diámetro de la columna, composición del buffer, volumen de inyección, composición de la fase móvil (adsorción y desorción), pH, velocidad de flujo, condiciones de equilibrio, unión, lavado y elución. |
Cromatografía de afinidad (AF) | ||
Cromatografía de intercambio aniónico (AEX) | ||
Concentración | Ultrafiltración, filtración de flujo tangencial | Tamaño de poro (o NMWC), presión transmembrana (TMP), Flujo, relación volumen de filtrado a área de membrana |
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